[發(fā)明專利]用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記、引物及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010938473.1
• 申請日: 2020-09-09
• 公開（公告）號: CN112011640B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設計）人: 趙勝杰;劉文革;路緒強;何楠;朱紅菊
• 申請（專利權）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 蔡少華

本發(fā)明屬于基因技術領域，涉及一種用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記、引物及應用，KASP分子標記對應西瓜基因組97103的第6號染色體第4852497位堿基，在低pH西瓜中第6號染色體第4852497位堿基為G；在高pH西瓜中第6號染色體第4852497位堿基為A。該KASP分子標記與目標性狀緊密連鎖，能夠用于鑒定或輔助鑒定西瓜果實pH，具有較高的準確率，KASP分子標記檢測方法可靠，操作簡便，通量高，在西瓜育種和生產(chǎn)中可以規(guī)?；瘧?，在苗期可以準確快速地鑒定出西瓜果實pH，能夠顯著縮短表型鑒定周期，進而提高育種效率。

技術領域

本發(fā)明屬于基因技術領域，涉及一種用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記、引物及應用。

背景技術

分子標記輔助選擇是將分子標記應用于作物品種改良過程中進行選擇的一種輔助手段，主要包括對目標性狀的前景選擇和對遺傳材料的背景選擇?？梢钥焖贆z測到目標基因或者與目標性狀基因緊密連鎖的位點，達到選擇目標性狀的目的，具有快速、準確、不受環(huán)境條件干擾的優(yōu)點。可以顯著加快選擇速度，縮短育種時間。

pH值是影響西瓜果實品質風味的重要組成因素，合適的糖含量和pH是形成優(yōu)質風味的必要條件。隨著人們生活習慣的改變，不同的消費者對酸甜口味有不同的偏好，當果實的含糖量較高時，較低pH值的果實更受歡迎。目前市場上的西瓜品種基本上是以甜為主，未見有高糖低pH即酸甜風味的品種報道。因此，培育高糖低pH值的西瓜新品種，對提高果品的營養(yǎng)價值，豐富西瓜品種多樣性具有重要的意義。

目前針對西瓜果實pH的研究不多，主要集中在成熟果實中有機酸的種類和含量，未見有與西瓜果實pH緊密連鎖分子標記開發(fā)和應用的相關報道，在一定程度上限制了風味西瓜分子育種的進程。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記，該標記位點是基于基因精細定位開發(fā)出來的與果實pH緊密連鎖的分子標記，在鑒定西瓜果實pH值時具有較高的準確性，通過分子標記輔助選擇有望加快高糖低pH西瓜選擇育種的進程。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案：

一種用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記，所述KASP分子標記對應西瓜基因組97103的第6號染色體第4852497位堿基，在低pH西瓜果實中第6號染色體第4852497位堿基為G；在高pH西瓜果實中第6號染色體第4852497位堿基為A。

用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記在西瓜分子標記輔助育種中的應用。

用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記的引物組，所述引物組包括FAM引物、VIC引物和COM引物，所述FAM引物序列如SEQ ID NO.1所示，所述VIC引物序列如SEQ ID NO.2所示，所述COM引物序列如SEQ ID NO.3所示。

含有上述用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記的引物組的試劑盒。

利用上述引物組鑒定西瓜品種的方法，包括以下步驟：

提取待測樣品西瓜組織的DNA作為模板，利用上述引物組對DNA模板進行PCR擴增，得到如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5序列所示的PCR擴增產(chǎn)物，對PCR擴增產(chǎn)物進行熒光掃描，采用Kraken^TM軟件進行基因型分析，則為高pH西瓜品種，若基因型為GG或GA，則為低pH西瓜品種。

用于鑒定西瓜果實pH的KASP分子標記的引物對在西瓜分子標記輔助育種中的應用。

相比現(xiàn)有技術，本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明利用重測序集團分離分析(BSR-Seq)獲得了控制西瓜果實pH的基因區(qū)間，通過F₂分離群體實現(xiàn)了目標基因的精細定位，開發(fā)出與目標性狀緊密連鎖的KASP分子標記，可用于西瓜分子標記輔助選擇育種，提高對果實pH選擇的準確性，加速育種進程。