[發明專利]一種胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備方法

在審

• 申請號: 202010937661.2
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN112029716A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 王學軍;牟浩;李偉
• 申請（專利權）人: 中康再生醫學科技（海南）有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備方法，以解決胎盤羊膜間充質干細胞的分離效率低、操作復雜、成本高的問題。所述分離制備方法步驟包括用手將羊膜沿臍帶和胎盤連接處從胎盤上剝離，用清洗液清洗，再用濃度含量75％的酒精漂洗；消毒過的手術剪將漂洗過的羊膜剪碎至1cm²的羊膜組織塊后，再用清洗液清洗一次后羊膜組織放入試管中加入胰酶處理；將胰酶處理過的羊膜組織用清洗液清洗后剪碎放入離心管中，加入膠原酶I和DNase I和生理鹽水震蕩消化；震蕩消化后加入生理鹽水離心，棄上清；離心后的細胞加入新鮮培養基接種于培養瓶中培養。本發明使胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備分離效率高，操作簡單，成本低。

技術領域

本發明屬于干細胞分離制備領域，特別涉及一種胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備方法。

背景技術

胎盤間充質干細胞是一種多能干細胞，是具有自我復制能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞像APSC多能細胞。在胚胎發育中來源于中胚層。在機體正常的組織損傷修復過程中，MSC是一種重要的參與組織再生的細胞庫。在組織損傷引起的特殊信號作用下，MSC遷移到受損部位，在局部聚集增殖，依據不同的損傷信號沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴增，體外倍增能力旺盛，即使擴增1億倍仍能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實用的組織修復種子細胞。

胎盤間充質干細胞具有強大的增殖能力和多向分化潛能，在適宜的體內或體外環境下具有分化為：上皮干細胞、神經干細胞、肝干細胞，肌細胞、成骨細胞、軟骨細胞、基質細胞等多種細胞的能力。可以用來修復受損或病變的組織器官，治療心、腦血管疾病、神經系統疾病、肝臟疾病、骨組織病、角膜損傷、燒傷燙傷、肌病等多種疾病。具有免疫調節作用，通過負性免疫調節功能，抑制機體亢進的免疫反應，使機體免疫功能恢復平衡，從而可以用來治療造血干細胞移植之后的免疫排斥反應以及克隆氏病、紅斑狼瘡，硬皮病等自身免疫系統疾病。

胎盤間充質干細胞是人體微環境的重要組成部分，移植間充質干細胞可以改變造血微環境，重建免疫系統，促進造血功能恢復，與造血干細胞共移植能顯著提高白血病和難治性貧血等的治療效果。

目前現有技術胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備存在分離效率低、操作復雜、成本高的問題。

發明內容

為了解決胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備存在分離效率低、操作復雜、成本高的問題，本發明提供了一種胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備方法，使胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備分離效率高，操作簡單，成本低。

為了達到上述目的，本發明所采用的技術方案如下：

本發明提供了一種胎盤羊膜間充質干細胞的分離制備方法，包括如下步驟：

步驟S1，將胎盤放置在處理盤中，用手將羊膜沿臍帶和胎盤連接處從胎盤上剝離，用清洗液清洗，再用濃度含量75％的酒精漂洗；

步驟S2，用濃度含量75％的酒精消毒過的手術剪將漂洗過的羊膜剪碎至1cm²的羊膜組織塊后，再用清洗液清洗一次，將清洗后的羊膜組織放入試管中加入胰酶，在35-37℃溫度下處理20-30分鐘；

步驟S3，將胰酶處理過的羊膜組織用清洗液清洗后剪碎至1-2mm²羊膜組織塊放入離心管中，每管放置8ml羊膜組織，加入膠原酶I和DNaseI和生理鹽水，在35-37℃下150rpm震蕩消化50-60分鐘；

步驟S4，震蕩消化后加入適量生理鹽水，在35-37℃溫度下1300rpm離心5分鐘，棄上清；

步驟S5，離心后的細胞加入10ml新鮮培養基接種于培養瓶中，將培養瓶放在CO₂培養箱中培養。

作為優選，步驟S3中離心管中膠原酶I的濃度為0.1％，DNaseI的濃度為0.02％。