[發(fā)明專利]基于PIT標(biāo)記的龜類產(chǎn)卵量及受精率的定量方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010935770.0
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN111972351B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王亞坤;朱新平;劉曉莉;于凌云;袁菊;李偉;洪孝友;謝敏敏
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 北京金智普華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

本發(fā)明屬于生物育種技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及基于PIT標(biāo)記的龜類產(chǎn)卵量及受精率的定量方法及應(yīng)用。本發(fā)明使用PIT標(biāo)記經(jīng)由背甲和腹甲之間容納后肢的間隙部位注射進(jìn)入腹腔，以實現(xiàn)對龜類的標(biāo)記。運(yùn)用掛簽法，即將上述的PIT編號用記號筆登記在制作好的圓形紙質(zhì)標(biāo)簽上，并用尼龍繩系在竹簽?zāi)┒耍邶旑惍a(chǎn)卵結(jié)束，即將完成卵的掩埋工作時，將竹簽插在雌龜產(chǎn)卵點旁，次日早晨收集龜卵。將PIT標(biāo)記和掛簽法相結(jié)合，即可解決個體產(chǎn)卵量和受精率不明的難題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物育種技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及基于PIT標(biāo)記的龜類產(chǎn)卵量及受精率的定量方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

PIT(passive integrated transponder)標(biāo)記，又稱被動集成應(yīng)答器，是一種基于無線射頻識別的標(biāo)記對動物進(jìn)行跟蹤識別的方法，近年來廣泛應(yīng)用于動物的行為、生長和資源監(jiān)測等研究。PIT標(biāo)記在魚類中應(yīng)用較為廣泛，而在其他水生動物中的應(yīng)用有限，尤其是在背有厚而堅硬的外骨骼等龜類中報道較少。

龜類屬于夜晚產(chǎn)卵類動物，且產(chǎn)卵結(jié)束后不具有護(hù)卵行為，因此，養(yǎng)殖條件下，現(xiàn)有的標(biāo)記技術(shù)很難將龜類的筑巢點與產(chǎn)卵母本準(zhǔn)確對應(yīng)。在無法確定親本產(chǎn)卵能力的基礎(chǔ)上，以產(chǎn)卵能力作為目標(biāo)性狀的選育工作因技術(shù)受限而一直遲滯不前。

目前，對于水產(chǎn)養(yǎng)殖龜類尚無有效的標(biāo)記方法。本申請發(fā)明人之前有使用在龜甲上刻字或者在龜甲邊緣打孔等方法，但是由于龜甲也會自然脫落，而且龜類日常活動，比如相互爬跨，打斗等都會造成龜甲邊緣的磨損，因此，該方法盡管短期內(nèi)可以分辨?zhèn)€體，但是短則半年，長則一年，刻字或者邊緣打孔均無法對個體進(jìn)行有效標(biāo)記。

黃喉擬水龜是我國重要的具有經(jīng)濟(jì)，藥用和觀賞價值的淡水龜類之一，是新興的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一。黃喉擬水龜一般4-5年性成熟，每年4-8月筑巢、產(chǎn)卵，個體間產(chǎn)卵量差異顯著。隨著黃喉擬水龜人工養(yǎng)殖規(guī)模持續(xù)擴(kuò)大，苗種獲得量少成為困擾該產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個問題。目前，在人工孵化技術(shù)比較成熟的情況下，苗種獲得量往往由產(chǎn)卵量和受精率決定，如何篩選到一批產(chǎn)卵能力強(qiáng)、受精率高的母本作為后備親本進(jìn)行強(qiáng)化培育，最終應(yīng)用于良種選育是獲得大量苗種的有效可行途徑之一。而且，產(chǎn)卵量高的母體其受精率到底如何？與產(chǎn)卵量低的個體相比，是高還是低？兩者有沒有顯著差異？這都是需要闡明的問題。所以，構(gòu)建一套能夠比較準(zhǔn)確地將筑巢點與產(chǎn)卵雌龜相關(guān)聯(lián)的標(biāo)記方法，并在此基礎(chǔ)上評估個體的產(chǎn)卵量和受精率，對于后續(xù)推進(jìn)高繁殖力品系的選育具有重要的應(yīng)用價值。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種基于PIT標(biāo)記的龜類產(chǎn)卵量及受精率的定量方法及應(yīng)用。利用本發(fā)明提供的技術(shù)方法確定養(yǎng)殖條件下黃喉擬水龜產(chǎn)卵個體的筑巢點，再分別結(jié)合PIT標(biāo)記和標(biāo)簽編號確定個體每次產(chǎn)卵的窩卵數(shù)，接著利用鉛筆對龜卵進(jìn)行編號，48小時后通過觀察卵的受精情況確定個體在繁殖季節(jié)的產(chǎn)卵量和受精率。本發(fā)明可準(zhǔn)確鑒定并篩選產(chǎn)卵能力強(qiáng)、受精率高的黃喉擬水龜母本用于構(gòu)建基礎(chǔ)群體進(jìn)行后續(xù)的良種選育工作。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種基于PIT標(biāo)記的龜類產(chǎn)卵量及受精率的定量方法，包括以下步驟：

利用PIT電子標(biāo)簽對雌龜進(jìn)行標(biāo)記：在繁殖期前，利用PIT電子標(biāo)簽對雌龜進(jìn)行標(biāo)記；所述雌龜為黃喉擬水龜；

登記產(chǎn)卵個體編號，標(biāo)記筑巢點：在雌龜產(chǎn)卵即將完成時，利用手持式掃碼機(jī)從雌龜后部讀取筑巢個體的電子標(biāo)簽編號，將編號用記號筆登記在制作好的圓形紙質(zhì)標(biāo)簽上，并用尼龍繩系在竹簽?zāi)┒耍逶诖讫敭a(chǎn)卵點旁；

龜卵收集及編號：用鉛筆對收集到的龜卵進(jìn)行編號，隨后在卵的上面鋪設(shè)一層沙子，放在聚乙烯盆中，待后續(xù)檢查受精情況；

統(tǒng)計受精率和產(chǎn)卵量：卵收集后48-72小時左右，輕輕撥開沙子，記錄卵的受精情況；受精卵的標(biāo)志是：在卵的中央周圍出現(xiàn)一個白色的受精斑，且隨著時間推移，白色受精斑逐漸環(huán)繞整個龜卵；否則，則定為非受精卵；

待繁殖期結(jié)束后，統(tǒng)計整個繁殖期黃喉擬水龜卵的受精率和產(chǎn)卵量。