[發明專利]一種離心式微流控芯片結合環介導等溫擴增技術用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測的試劑盒

在審

• 申請號: 202010935258.6
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN112195273A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 藍天;陳詠輝;周玲;馬靜云;李倩妞;孫媛;盧先東;劉艷紅
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州正明知識產權代理事務所(普通合伙) 44572
• 代理人: 張麗

1.一種用于豬繁殖和呼吸綜合征病毒檢測的特異性引物組，其特征在于，所述引物組序列如SEQ ID NO：1～10所示，其中，SEQ ID NO：1～5所示序列用于檢測歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒，SEQ ID NO：6～10所示序列用于檢測美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒。

2.一種用于檢測豬繁殖和呼吸綜合征病毒的微流控芯片試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的特異性引物組。

3.根據權利要求2所述的微流控芯片試劑盒，其特征在于，所述特異性引物組中，SEQID NO：1～5所示序列和SEQ ID NO：6～10所示序列分別包括外引物、內引物和環引物，其中，外引物、內引物和環引物的摩爾比為1：8：4。

4.根據權利要求3所述的微流控芯片試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括恒溫擴增預混液、陽性標準品。

5.根據權利要求4所述的微流控芯片試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括微流控芯片、逆轉錄酶溶液、RNase抑制劑。

6.根據權利要求5所述的微流控芯片試劑盒，其特征在于，所述微流控芯片設有4個相互獨立的檢測模塊，每一個檢測模塊包含有1個加樣孔和1組反應池，每一個檢測模塊的1組反應池包括6個臨床樣品擴增池和2個陰性對照反應池，SEQ ID NO：1～5所示序列和SEQ IDNO：6～10所示序列分別均經加熱干燥包被固定在對應臨床樣品擴增池內。

7.根據權利要求6所述的微流控芯片試劑盒，其特征在于，所述恒溫擴增預混液為含有800U/mL的Bst DNA聚合酶、50μM熒光染料SYBR Green的LAMP反應液。

8.根據權利要求7所述的微流控芯片試劑盒，其特征在于，所述逆轉錄酶溶液為5000U/mL的M-MLV，所述RNase抑制劑濃度為40U/μL，所述陽性標準品為TPRRSV-1-ORF7-RNA和TPRRSV-2-P83-RNA。