[發明專利]一種間充質干細胞成脂分化培養基及其應用

有效

• 申請號: 202010935109.X
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN111979185B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 于寶利;李其雷;陳旭;陳剛;楊建國;孫芳
• 申請（專利權）人: 依科賽生物科技（太倉）有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 上海九澤律師事務所 31337
• 代理人: 蔡佳杰

本發明涉及一種間充質干細胞成脂分化培養基及其應用，其特征在于包括基礎培養基和添加組分，所述培養基包括:優化設計的多種無機鹽、氨基酸、維生素等成分、以及重組人血清白蛋白、羧甲基纖維素鈉、3?異丁基?1?甲基黃嘌呤、重組人胰島素、地塞米松、匹格列酮鹽酸鹽、棕櫚酸、油酸、亞油酸、膽固醇等成分。本發明通過優化設計各組分的添加以及配比，顯著提高了培養基誘導間充質干細胞向脂肪細胞分化的能力，分化時間進一步縮短。

技術領域

本發明屬于屬于細胞培養技術領域，具體涉及一種間充質干細胞成脂分化培養基及其用。

背景技術

間充質干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)，起源于中胚層，是一種多能干細胞，主要存在于結締組織和器官間質中，具有強大的自我更新和多向分化能力，具有在體外分化為脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞、神經細胞等多種細胞的能力。

間充質干細胞來源豐富，廣泛存在于骨髓、脂肪、臍帶等組織，具有來源方便，易于分離、培養、擴增和純化，多次傳代擴增后仍具有干細胞特性，并且具有低免疫原性，異體移植排異較輕，配型要求不嚴格；具有免疫調節功能，通過細胞間的相互作用及產生細胞因子抑制T細胞的增殖及其免疫反應，從而發揮免疫重建的功能；正是由于擁有這些特性，使得間充質干細胞能夠提供一種理想的生物學平臺，用于科學研究與臨床應用，如細胞治療、再生醫學、藥物篩選、基因治療載體的建立、細胞發育與分化的分子調節機制研究、組織工程種子細胞等。

無論在科學研究還是臨床應用上，間充質干細胞的鑒定一直是需要面對的問題。更由于臨床應用的特殊性，用于細胞治療的間充質干細胞的鑒定越來越受到重視，國家有關部門也出臺了相關文件，《干細胞臨床研究管理辦法(試行)》(國衛科教發〔2015〕48號)和《干細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則(試行)》明確提出可通過檢測干細胞分化潛能、誘導分化細胞的結構和生理功能、對免疫細胞的調節能力、分泌特定細胞因子、表達特定基因和或蛋白等功能，判斷干細胞制劑與治療相關的生物學有效性。對間充質干細胞，無論何種來源，應進行體外多種類型細胞(如成脂肪細胞、成軟骨細胞、成骨細胞等)分化能力的檢測，以判斷其細胞分化的多能性。

目前也有效果較好的商業化培養基，如STEMCELL公司的成脂分化培養基產品(STEMCELL，05412)，分化效果優良，在部分間充質干細胞中可以實現7-14天成脂分化，但是該培養基成本很高。

目前也有同類型專利申請，通常采用胎牛血清、胰島素、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、糖皮質激素和噻唑烷二酮等物質協同作用，誘導成脂分化，雖然這些成分也能誘導間充質干細胞的成脂分化，但是其分化效率較低，所用時間較長，存在效能不足的缺陷。

發明內容

針對現有技術中的不足，本發明設計開發了一種新的間充質干細胞培養基。

本發明的第一個目的是，針對現有成脂分化培養基分化效率低、分化時間長的不足，提供一種間充質干細胞成脂分化培養基，可以實現更短時間誘導間充質干細胞向脂肪細胞的分化。

本發明的第二個目的是，提供間充質干細胞成脂分化培養基的用途。

為了實現上述第一個目的，本發明采用的技術方案是：

基礎培養基和添加組分組成，基礎培養基由無機鹽組分、氨基酸組分、維生素組分、核苷酸組分、微量元素組分和碳水化合物組成，添加組分由重組人血清白蛋白、羧甲基纖維素鈉、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、重組人胰島素、地塞米松、匹格列酮鹽酸鹽、棕櫚酸、油酸、亞油酸、膽固醇組成。

優選的，添加組分以體積計，各成分的含量為：重組人血清白蛋白100g/L、羧甲基纖維素鈉100g/L、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤50mM、重組人胰島素500uM、地塞米松50uM、匹格列酮鹽酸鹽1mM、棕櫚酸3mM、油酸1mM、亞油酸3mM、膽固醇1mM；

基礎培養基與添加組分的體積比為100：0.1～100：3。