[發明專利]一種高效檢測豬丹毒絲菌的引物以及試劑盒

在審

• 申請號: 202010932380.8
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN112029878A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 盧先東;劉艷紅;乙叢敏;劉萌
• 申請（專利權）人: 寧波愛基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 寧波甬致專利代理有限公司 33228
• 代理人: 李迎春

本發明公開一種高效檢測豬丹毒絲菌的引物以及試劑盒，發明以改良后的LAMP技術為基因擴增反應原理，在反應體系里加入金納米顆粒，吸附ssDNA和蛋白酶，抑制升溫過程中的非特異性反應，達到熱啟動的目的，避免在升溫過程中的非特異性反應；結合改良后的LAMP技術與微流控芯片技術，即可以快速給出準確的檢測結果，又達到同一樣品多個不同指標聯檢的目的，同時，反應試劑預埋于微流控芯片上，用戶只需加入樣品，操作簡便。

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，具體涉及一種高效檢測豬丹毒絲菌的引物以及試劑盒。

背景技術

豬丹毒病（Swine erysipelas，SER）又稱“打火印”，二類傳染病、寄生蟲病。是由豬丹毒絲菌(E.rhusiopathiae)引起的一種急性、熱性人畜共患傳染病，屬于農業部公布的二類動物疫病。該病廣泛存在于世界各地，主要發生于豬，最易侵害母豬和架子豬，發病初期多為急性敗血型或亞急性的疹塊型，隨后轉為慢性型，患豬多發生關節炎、心內膜炎。該病毒的檢測如果采用現有的PCR技術，由于其反應要在2個不同的溫度區循環，對儀器要求高，成本也相對高昂，并且PCR技術僅僅1對擴增引物，易受干擾，特異性相對不足，且出結果時間較久，操作專業要求高，微量加量步驟多。而LAMP技術共有4條不同的特異性引物，故而檢測結果準確度更高，但是由于是恒溫反應，缺少類似PCR的熱啟動酶，在設備升溫階段容易產生非特異性擴增從而影響檢測結果。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的缺陷提供一種高效檢測豬丹毒絲菌的引物及試劑盒。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種高效檢測豬丹毒絲菌的引物，具體為：

spaA-F3：TTTAACWGCAATGCCACTAC；

spaA-B3：TTGGTACCCCTTTGGTTC；

spaA-FIP：

AATCCAACTTGTTCACCGATTAGT-AAACAGCTTTTGCTGATTCG；

spaA-BIP：

AGGAATACAACAAAATGACTGATGC-TTTATAAGAAACGGCTTCACT。

本發明提供一種高效檢測豬丹毒絲菌的試劑盒，所述試劑盒包括上述引物以及反應液，所述反應液的組成為：

20 mM Tris-HCl 0.4 μL；

40 mM KCl 6.8 μL；

100 mM （NH₄）₂SO_{4 1.8 μL；}

80 mM MgSO_{4 1.8 μL；}

1% Tween-20 1.8 μL；

28 mM dNTPs 0.9 μL；

8000U/mL Bst酶 1.8 μL；

1 mM SYBRGREEN熒光染料 0.9 μL；

4.0×10^-6 mol/L 金納米顆粒 1.8 μL；