[發(fā)明專利]同時(shí)檢測(cè)多個(gè)輻射敏感性相關(guān)SNP位點(diǎn)的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010929474.X
• 申請(qǐng)日: 2020-09-07
• 公開（公告）號(hào): CN112195229B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張陽(yáng)東;鄧致榮;江其生;呂進(jìn);郭寶石;胡紅芳;蘇璞;殳曉強(qiáng);郭惠民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍火箭軍特色醫(yī)學(xué)中心
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6872;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 杭州宇信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

本發(fā)明公開了一種同時(shí)檢測(cè)輻射敏感性相關(guān)多種基因多個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)的試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明通過設(shè)計(jì)每個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增引物和單堿基延伸引物，通過多重PCR和多重單堿基延伸反應(yīng)，進(jìn)而進(jìn)行質(zhì)譜分析其特異性的產(chǎn)物，判定每一個(gè)位點(diǎn)的基因型，其檢測(cè)特異性強(qiáng)、靈敏度高，同時(shí)具有快速、穩(wěn)定、高通量、價(jià)格低廉且操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，可應(yīng)用于科研、涉核人員輻射敏感性的篩查。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種同時(shí)檢測(cè)輻射敏感性相關(guān)多種基因多個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)的試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明通過設(shè)計(jì)每個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增引 物和單堿基延伸引物，通過多重PCR和多重單堿基延伸反應(yīng)，進(jìn)而進(jìn)行質(zhì)譜分析其特 異性的產(chǎn)物，判定每一個(gè)位點(diǎn)的基因型。

背景技術(shù)

經(jīng)過幾十年的努力，我國(guó)的核技術(shù)產(chǎn)業(yè)已進(jìn)入快速發(fā)展期，核技術(shù)目前已廣泛應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)療、環(huán)保、軍事等領(lǐng)域。民用核技術(shù)應(yīng)用中最為大家熟知的是核 電站，我國(guó)已建成近五十臺(tái)核電機(jī)組，并有幾十臺(tái)核電機(jī)組正在建設(shè)中。除了核電站， 民用核技術(shù)還包括以帶電粒子加速器、放射性同位素為輻射源的輻射技術(shù)應(yīng)用和以放 射性同位素為載體的輻射、示蹤技術(shù)應(yīng)用等。民用核技術(shù)應(yīng)用不僅可以加快推動(dòng)相關(guān) 產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)，還可以產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

核輻射作用于機(jī)體，可使生物大分子發(fā)生激發(fā)和電離，導(dǎo)致多種生物學(xué)效應(yīng)。在核事故和一次性大劑量照射情況下，公認(rèn)為染色體畸變與劑量有相應(yīng)的關(guān)系，染色體 畸變損傷是反映輻射劑量和效應(yīng)的敏感指標(biāo)。但是人體對(duì)電離輻射的反應(yīng)有較大差異， 即使是在暴露輻射環(huán)境相同、輻射防護(hù)條件一致的情況下，同一職業(yè)群體所表現(xiàn)出的 染色體受損情況亦有很大差別，有人染色體損傷明顯，有人卻不發(fā)生損傷。可見個(gè)體 易感因素在輻射損傷發(fā)生中的作用不可忽視。而長(zhǎng)期接觸低劑量射線，染色體損傷程 度無明顯加重，可能是小劑量長(zhǎng)期照射，機(jī)體的損傷與修復(fù)基本達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，也可 能有低劑量輻射誘發(fā)的細(xì)胞遺傳學(xué)適應(yīng)性反應(yīng)參與。隨著分子檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，人們 認(rèn)識(shí)到個(gè)體在應(yīng)對(duì)輻射危害時(shí)表現(xiàn)出的輻射敏感性差異，本質(zhì)是基因?qū)椛涞姆磻?yīng)不 同。各種輻射導(dǎo)致的DNA損傷主要包括堿基損傷和DNA鏈斷裂，包括單鏈和雙鏈的 斷裂,而受損的DNA若不能及時(shí)、有效地修復(fù),尤其是雙鏈斷裂的修復(fù)缺陷,便會(huì)引 起染色體斷裂、細(xì)胞凋亡、無節(jié)律增殖，甚至形成腫瘤。人類正常細(xì)胞中存在一整套 復(fù)雜、精密的DNA修復(fù)系統(tǒng)，及時(shí)修復(fù)受損DNA，保證細(xì)胞正常復(fù)制。DNA損傷修 復(fù)能力的差異是決定該個(gè)體遺傳損傷易感性的一個(gè)重要因素。由于SNP可增加同義或 者非同義氨基酸替換，改變?cè)摶蛩幋a的蛋白表達(dá)和蛋白活性，一些基因尤其DNA 損傷修復(fù)基因多態(tài)性決定了個(gè)體間電離輻射所致DNA損傷修復(fù)能力上的差異，是導(dǎo) 致不同個(gè)體間輻射敏感性差異的遺傳學(xué)基礎(chǔ)。因此通過基因SNP與輻射損傷之間的關(guān) 聯(lián)性研究，探尋發(fā)現(xiàn)生物個(gè)體的輻射易感基因，可實(shí)現(xiàn)早期發(fā)現(xiàn)輻射易感個(gè)體，降低輻射損傷風(fēng)險(xiǎn)。

共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥突變基因(ATM)是DNA損傷修復(fù)的重要基因之一， 在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮作用。ATM的突變和失活可使此基因生物功能的不穩(wěn)定性增加， 在DNA雙鏈斷裂修復(fù)過程中發(fā)生障礙，從而表現(xiàn)出對(duì)輻射的高度敏感。趙君彥等以放 射作業(yè)人員為研究對(duì)象，通過染色體畸變和SNP的相關(guān)性研究，結(jié)果顯示ATM基因 rs189037位點(diǎn)與放射作業(yè)人員發(fā)生染色體損傷的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，其GA/AA基因型可能是職 業(yè)性小劑量輻射的敏感基因型。大量的研究結(jié)果顯示ATM基因rs189037、rs373759、 rs4988044、rs1801516和rs228590位點(diǎn)與腫瘤的易感性和腫瘤放射治療時(shí)發(fā)生的放射 性損傷相關(guān)。