[發(fā)明專利]基于不同結(jié)構(gòu)適配體雙比率生物傳感器的制備方法及應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2020-09-07
• 公開（公告）號: CN112285172B
• 公開（公告）日: 2022-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李玉葉;由天艷;劉東;李文佳;朱成喜
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N27/416
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1.一種基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

(1)無標(biāo)記電化學(xué)探針AQ-rGO復(fù)合材料的制備：

首先將蒽醌與還原氧化石墨烯分別用超純水溶解，得到AQ分散液、rGO分散液；然后使用細胞粉碎機處理rGO分散液，再將處理后的rGO分散液與AQ分散液混合，經(jīng)磁力攪拌、離心、水洗，得到AQ-rGO復(fù)合材料，并將其分散在超純水中，得到AQ-rGO復(fù)合材料分散液，室溫儲存?zhèn)溆茫?/p>

(2)取玻碳電極依次用不同粒徑的三氧化二鋁粉末打磨，打磨后的玻碳電極，分別在乙醇和水中超聲后于空氣中干燥，得到處理后的玻碳電極；

(3)將步驟(1)制備的無標(biāo)記電化學(xué)探針AQ-rGO復(fù)合材料分散液修飾到步驟(2)所處理后的玻碳電極表面，在室溫下自然晾干，修飾后的玻碳電極記為AQ-rGO/GCE；

(4)將金納米粒子修飾在步驟(3)所制得AQ-rGO/GCE的傳感界面，修飾后的材料，記為AuNPs/AQ-rGO/GCE；

(5)放大線性范圍的雙比率電化學(xué)傳感器的構(gòu)建：

二茂鐵標(biāo)記的線性適配體，記為Fc-apt；亞甲基藍標(biāo)記的發(fā)夾適配體，記為MB-HR；兩者混合后在一定溫度條件下反應(yīng)，反應(yīng)后的溶液記為Fc-apt-MB-HR；再將Fc-apt-MB-HR修飾在步驟(4)制備AuNPs/AQ-rGO/GCE的傳感界面上，孵育固定后獲得基于Fc-apt-MB-HR的雙比率電化學(xué)適配體傳感器，即為基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器，記為Fc-apt-MB-HR/AuNPs/AQ-rGO/GCE。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述AQ分散液的濃度為0.5mg·mL^-1，rGO分散液的濃度為0.05mg·mL^-1；所述細胞粉碎機處理rGO分散液的時間為30min；所述AQ分散液與rGO分散液的體積比為3:10；所述磁力攪拌的時間為18h；所述離心的轉(zhuǎn)速為8000rpm，時間為15min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述AQ-rGO復(fù)合材料與超純水的用量比為(0.02-00.5)mg:(2-3)mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述玻碳電極的直徑d＝3mm；所用的三氧化二鋁粉末的粒徑依次為0.3μm、0.05μm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述AQ-rGO復(fù)合材料修飾的用量為6μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，所述AuNPs修飾的用量為6μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，所述Fc-apt濃度為2.0-6.0μM，MB-HR濃度為2.0-6.0μM，F(xiàn)c-apt與MB-HR按照1:1體積比混合，所述一定溫度條件為4℃，反應(yīng)時間為1h。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于不同結(jié)構(gòu)適配體放大線性范圍雙比率生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，所述Fc-apt-MB-HR修飾的用量為6μL，濃度為2.0μM；所述孵育固定的時間為12h，溫度為4℃。