[發明專利]一種高得率的游離DNA和RNA共抽提試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 202010926134.1
• 申請日: 2020-09-07
• 公開（公告）號: CN112080492A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 崔芳巖;鹿亞超
• 申請（專利權）人: 麥凱（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所(普通合伙) 31233
• 代理人: 魏峯

本發明涉及一種高得率的游離DNA和RNA共抽提試劑盒及使用方法，包括含有GITC的裂解液、硅基納米磁珠和漂洗液。本發明采用特殊的裂解液提高了游離DNA和RNA的得率，同時又保證了RNA的完整性；采用磁珠進行抽提簡化了操作，節約時間，易于自動化，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種高得率的游離DNA和RNA共抽提試劑盒及使用方法。

背景技術

血清/血漿或其他體液中的游離核酸(cfNA，游離DNA和RNA，cfDNAcfRNA)的遺傳和表觀遺傳分析，為廣泛的臨床疾病如癌癥、自身免疫性疾病、感染或胎兒的疾病的早期檢測，提供了一個極難得的機會。絕大多數的患者體液中游離核酸含量非常低，片段小，提取過程中容易丟失，得率不高，使檢測靈敏度降低，給后續檢測帶來很大挑戰。目前，已有相關技術針對抽提游離DNA或游離RNA提出了改進方案和產品，但是同時檢測游離DNA和RNA是一種新的需求，而cfDNAcfRNA共抽提試劑盒少之又少，不能很好的滿足檢測的需求。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種高得率的游離DNA和RNA共抽提試劑盒及使用方法，解決了現有技術多用吸附柱法，但通量低、不易自動化、成本相對較高的缺陷。

本發明提供了一種高得率的游離DNA和RNA共抽提試劑盒，包括含有GITC的裂解液、硅基納米磁珠和漂洗液。

所述含有GITC的裂解液的組成為：4-10M GITC，10-100mM Tris-HCl，1-10％SDS，5-15％TWEEN-20，1-2mM DTT。高濃度蛋白質變性劑GITC(四乙酰基-b-D-葡萄糖異硫氰酸酯)能快速破壞細胞膜，進而迅速抑制住細胞內的RNA酶，從而確保了RNA的完整性。

所述硅基納米磁珠的濃度為10-100mg/mL。磁珠當高鹽低pH值時結合核酸，當低鹽高pH值時洗脫，可實現手動操作類似一管內抽提，實現抽提的自動化，不需要離心、轉移等步驟，最大限度地降低核酸的丟失，提高核酸的得率。硅基納米磁珠，粒徑納米級，具有超順磁性，快速磁響應性，懸浮性好，沉降時間長，同時吸磁時間短，吸附量大，適用于微量樣本、小片段DNA/RNA的分離純化。

所述漂洗液的組成為：1-10mM Tris-HCl，50-80％異丙醇。所述漂洗液可以有效去除殘留的雜質，避免核酸的丟失，提高核酸的得率。

本發明還提供了一種高得率的游離DNA和RNA共抽提試劑盒的使用方法，包括如下步驟：

首先向樣本中加入含有GITC的裂解液和硅基納米磁珠，渦旋混勻后室溫震蕩，靜置后再加入漂洗液，渦旋混勻后室溫震蕩，靜置后最后加入Elution Buffer，渦旋后靜置進行檢測。

所述樣本與含有GITC的裂解液的體積比為1:1.5-2。

所述樣本與硅基納米磁珠的體積比為1:0.02-0.04。

所述樣本與漂洗液的體積比為1:1-1.5。

所述樣本與Elution Buffer的體積比為1:0.04-0.08。

有益效果

本發明采用特殊的裂解液提高了游離DNA和RNA的得率，同時又保證了RNA的完整性；采用磁珠進行抽提簡化了操作，節約時間，易于自動化，相比于吸附柱方法通量更高，具有良好的應用前景。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。