[發明專利]豬δ冠狀病毒和急性腹瀉綜合征冠狀病毒檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202010923195.2
• 申請日: 2020-09-04
• 公開（公告）號: CN112029908A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 閆若潛;班付國;謝彩華;王東方;劉影;馬震原;郭育培;楊海波;王淑娟;王華俊;柴茂;劉梅芬;趙雪麗;劉敏;趙美雪
• 申請（專利權）人: 河南省動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

1.豬δ冠狀病毒檢測引物，其特征在于，包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ IDNO:2所示的下游引物。

2.與權利要求1所述引物配套使用的探針，其特征在于，探針序列如SEQ ID NO:3所示。

3.豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒檢測引物，其特征在于，包括如SEQ ID NO:4所示的上游引物和SEQ ID NO:5所示的下游引物。

4.與權利要求3所述引物配套使用的探針，其特征在于，探針序列如SEQ ID NO:6所示。

5.用于豬δ冠狀病毒和豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒二重實時熒光定量PCR檢測的引物和探針組合，其特征在于，豬δ冠狀病毒檢測引物和探針I的序列如SEQ ID NO:1-3所示，豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒檢測引物和探針II的序列如SEQ ID NO:4-6所示；探針I和探針II的5′端具有熒光基團，3′端具有淬滅基團，探針I的熒光基團不同于探針II的熒光基團。

6.豬δ冠狀病毒和急性腹瀉綜合征冠狀病毒檢測試劑或試劑盒，其特征在于，包含權利要求5所述引物和探針組合。

7.用于檢測豬δ冠狀病毒和豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒的二重實時熒光定量PCR反應體系，其特征在于，所述二重實時熒光定量PCR反應體系包含：SEQ ID NO:1所示的上游引物0.2μM和SEQ ID NO:2所示的下游引物0.4μM，SEQ ID NO:3所示的探針0.2μM，SEQ ID NO:4所示的上游引物0.2μM和SEQ ID NO:5所示的下游引物0.4μM，SEQ ID NO:6所示的探針0.2μM，2.5mM dNTPs 2μL，10×Ex Taq酶緩沖液2.5μL，5U/μL Ex Taq DNA聚合酶0.25μL，cDNA模板4μL，ddH₂O補足至總體積25μL。

8.非診斷目的豬δ冠狀病毒和豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒二重實時熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測樣品總RNA，反轉錄成cDNA；

2)利用權利要求7中所述的二重實時熒光定量PCR反應體系進行PCR擴增；

3)分析PCR擴增產物。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，PCR擴增的程序為：94℃6分鐘；94℃30秒，60℃45秒，40個循環。