[發明專利]一種檢測5F-AMB體內生物標記物及其應用

在審

• 申請號: 202010921040.5
• 申請日: 2020-09-04
• 公開（公告）號: CN112067715A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 柯星;呂云平;范一雷;何丹丹;周善慧
• 申請（專利權）人: 浙江警察學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/88;G01N30/86
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 朱亞冠

本發明公開一種檢測5F?AMB體內生物標記物及其應用。檢測合成大麻素5F?AMB的體內生物標記物如表1。本發明克服合成大麻素5F?AMB在體內代謝速度快，在生物檢材中的母體藥物含量一般較低，提供一種利用體內代謝標記物進行檢測，精確度高，靈敏度高，結果準確可靠。本發明所需的檢測樣本生物量較少，僅為100μl。

技術領域

本發明涉及確證一種合成大麻素5F-AMB生物標記物，特別應用高效液相串聯靜電軌道離子阱高分辨質譜檢測結合肝微粒體體外孵育實驗，通過篩查5F-AMB體外代謝產物，分析5F-AMB的生物標記物，并通過大鼠體內實驗驗證。

背景技術

合成大麻素是一類對人體作用機理與天然大麻素四氫大麻酚(Tetrahydrocannabinol,THC)相似的新精神活性物質，主要通過結合人體內的中樞型受體CB1和末梢型受體CB2發揮作用，相比于天然大麻素，合成大麻素在人體內發揮的藥效更強，危害更大。從結構上來說，很多合成大麻素與經典大麻素無關；按照結構來分，合成大麻素大致可分為七類，萘甲酰基吲哚類(JWH-018)、萘甲基吲哚類、萘甲酰基吡咯類、萘甲基茚類、苯乙酰基吲哚類(JWH-250)、環乙基苯酚類(CP47,497)和傳統大麻素。與合成大麻素嚴峻形勢相對的是目前對于合成大麻素藥理學和毒理學研究報告較少，同時檢測方法滯后。

合成大麻素是一類親脂性較強的化合物，在體內代謝速度較快，生物檢材中的母體藥物含量一般較低，因此確定合成大麻素的生物標記物尤為重要。目前國內外對合成大麻素代謝物的研究可以分為體內代謝和體外代謝，體外代謝方法主要包括人肝細胞培養和肝微粒體孵育實驗，體內代謝則以大鼠模型和斑馬魚模型為主。肝微粒體體外孵育實驗具有操作簡單，成本低等優點。

5F-AMB為吲唑-3-甲酰胺類合成大麻素類新精神活性物質,是5F-AB-PINACA的結構衍生物。從2013年11月至2014年5月,在日本非法產品調查中，發現了19種新分布的設計藥物,其中就包括5F-AMB。2015年，日本報告了兩起因多種藥物死亡的病例，包括AB-CHMINACA，5F-AMB和聯苯甲醚。5F-AMB被定為中國、新加坡、日本的非法藥物。

因此本發明擬開發一種簡單易操作的體外孵育實驗結合大鼠體內實驗，用于合成大麻素5F-AMB代謝物的研究及生物標記物的確證。

發明內容

本發明的第一個目的是針對現有技術的不足，提供一種檢測合成大麻素5F-AMB的體內生物標記物。確定5F-AMB的生物標記物，通過高效液相串聯靜電軌道離子阱高分辨質譜檢測結合化肝微粒體體外孵育實驗的方法，得到5F-AMB體外代謝產物，通過篩查代謝產物，對5F-AMB的生物標記物進行分析，并采用大鼠體內實驗驗證。

表1：檢測合成大麻素5F-AMB的體內生物標記物

本發明的第二個目的是提供上述利用上述體內生物標記物在非診斷目的的檢測合成大麻素5F-AMB應用。

本發明的第三個目的是提供上述利用上述體內生物標記物的非診斷目的的合成大麻素5F-AMB檢測方法，具體是：

(1)取100μl尿液加入3倍體積的乙腈，渦旋，時間不少于30s，大于12000rpm的轉速離心一定時間，取上清液；

(2)將上述濾液進行高效液相串聯靜電軌道離子阱高分辨質譜檢測，若同時檢測到表1三種標記物則認為事先服用合成大麻素5F-AMB。

所述液相色譜條件：

色譜柱：Waters UPLC HSS T3；

柱溫：30℃；

流動相：流動相A為0.1％甲酸水，流動相B為0.1％甲酸乙腈；