[發明專利]人乳頭瘤病毒16型表位嵌合L1的重組載體、重組蛋白、病毒樣顆粒及其制備和應用

在審

• 申請號: 202010920896.0
• 申請日: 2020-09-04
• 公開（公告）號: CN111944834A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 劉微;孫美艷;郭健;張磊;許會靜;王皓
• 申請（專利權）人: 吉林醫藥學院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00;A61K39/12;A61P31/20;A61P35/00
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 劉小嬌

本發明構建了含有人乳頭瘤病毒16型表位嵌合DNA片段的病毒樣顆粒系統，首先將含有人乳頭瘤病毒16型E7_49?57表位嵌合主要衣殼蛋白L1DNA片段連接在質粒pET28a上構建重組質粒pET28a?16L1?E7_49?57，然后將其轉入大腸桿菌中進行培養得到重組蛋白，進而進行自組裝得到病毒樣顆粒(VLPs)；組裝后的表位嵌合病毒樣顆粒能夠同時激發體液和細胞免疫應答。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及含有人乳頭瘤病毒16型表位嵌合L1的重組載體、重組蛋白、病毒樣顆粒及其制備和應用。

背景技術

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率居女性惡性腫瘤第二位,且發病逐漸趨于年輕化。據世衛組織報道，2018年全球宮頸癌新發病例57萬，死亡人數31.1萬,嚴重危害女性健康。目前宮頸癌預防性疫苗的研究較成功，國際上市的HPV疫苗分別是默沙東公司生產的四價疫苗佳達修-4(Gardasil-4)和九價疫苗佳達修-9(Gardasil-9)，以及葛蘭素史克公司的二價疫苗希瑞適(Cervarix)，三種疫苗均是以體外表達的HPV L1衣殼蛋白自組裝成VLPs為有效抗原，混合佐劑誘導機體產生中和抗體。此類疫苗能有效預防高危型HPV病毒感染，但對已經感染HPV的人群無效。

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是誘發女性宮頸癌的主要原因。已知發現的HPV亞型達200多種，其中HPV16和18型屬于高危型中最易致癌型，超過70％的宮頸癌病變由此導致。HPV疫苗是控制宮頸癌的有效手段之一。HPV的主要衣殼蛋白L1可以單獨表達并自組裝成病毒樣顆粒(virus-like particles，VLPs)。VLPs與天然病毒的結構高度相似，將其免疫機體后可刺激產生高滴度的中和抗體，目前，利用VLPs研制的HPV預防性疫苗已用于臨床。但是，此類疫苗誘導機體產生的細胞免疫應答較弱。HPV基因組的早期轉錄區(E區)編碼的E7蛋白是導致細胞發生惡性轉化的關鍵。E7_49-57表位能誘導T淋巴細胞分化為細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic lymphocyte，CTL)。

發明內容

基于上述技術問題，本發明的發明目的之一是提供了含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1 DNA片段。

本發明的發明目的之二是提供了含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1 DNA片段的重組載體。

本發明的發明目的之三是提供了含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1 DNA片段的重組載體的構建方法。

本發明的發明目的之四是提供了含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1的重組蛋白。

本發明的發明目的之五是提供了含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1重組蛋白的構建方法。

本發明的發明目的之六是提供了含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1的病毒樣顆粒。

本發明的發明目的之七是提供了含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1的病毒樣顆粒的制備方法。

本發明的發明目的之八是提供了含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1的病毒樣顆粒在制備人乳頭瘤病毒疫苗的應用。

本發明提供的技術方案為：

含有人乳頭瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1 DNA片段，所述DNA片段的序列如SEQ IDNO.1所示。