[發(fā)明專利]一種同時檢測11種維生素的方法和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010919401.2
• 申請日: 2020-09-04
• 公開（公告）號: CN114137139A
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邱雪梅;林清娜;訾金;林梁;魏媛儀;吳志峰;石一云
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳華大臨床檢驗中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44281
• 代理人: 李小焦;彭家恩

本申請公開了一種同時檢測11種維生素的方法和試劑盒。本申請同時檢測11種維生素的方法，其中，11種維生素包括硫胺素、核黃素、煙酸、煙酰胺、泛酸、吡哆酸、吡哆醇、生物素、5?甲基四氫葉酸、鈷胺素和維生素C；該方法包括在液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測時，使用改進的水相和有機相；水相由濃度0.1％甲酸、濃度2?5mM乙酸銨和水組成；有機相由濃度0.1％甲酸、濃度2?5mM乙酸銨和有機溶劑組成。本申請的方法，通過對液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測的水相和有機相進行改進，使得11種水溶性維生素在色譜行為上具有良好的分離度和峰型，從而實現(xiàn)了11種水溶性維生素的同時檢測，提高了水溶性維生素的檢測效率，降低了檢測成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及維生素檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種同時檢測11種維生素的方法和試劑盒。

背景技術(shù)

維生素是一類微量有機物質(zhì)，以生物酶的輔酶或輔基形式參與機體新陳代謝或調(diào)節(jié)能量轉(zhuǎn)化。根據(jù)溶解性的差異，可將維生素大致分為脂溶性維生素和水溶性維生素兩大類。水溶性維生素包括維生素B族、硫辛酸和維生素C，主要有硫胺素(VB1)、核黃素(VB2)、煙酸和煙酰胺、吡哆酸(VB6PA)、葉酸、泛酸、生物素、鈷胺素和維生素C等。

人體雖然對維生素的需求量很少，但是，維生素在體內(nèi)不能合成或合成量不足，必需由食物供給。在人類常見的疾病中，很大部分與維生素攝取不足有關(guān)。目前，已知水溶性維生素具備多種生理功能。水溶性維生素易溶于水，在機體代謝中大部分隨尿液排出，在體內(nèi)不能多儲存。對多種水溶性維生素的精準檢測有利于機體內(nèi)維生素水平的監(jiān)測，有助于飲食結(jié)構(gòu)調(diào)整，疾病預防和治療。準確靈敏地測定食物、藥品和生物樣品中水溶性維生素的含量也具有十分重要的意義。

由于水溶性維生素化學結(jié)構(gòu)各異，理化性質(zhì)差異較大，對酸堿條件的耐受性不同，一次性提取多種水溶性維生素是一個較大的挑戰(zhàn)。現(xiàn)有的水溶性維生素分析和檢測，常見提取方法有鹽析法、液液萃取法、蛋白沉淀法等，適用于一種或者少數(shù)幾種水溶性維生素的提取。同時水溶性維生素分析檢測不穩(wěn)定性高，檢測過程中容易因降解而無法檢出。常見檢測方法有紫外分光光度法、分子熒光法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等。其中紫外分光光度法操作簡單快速，但選擇性強，受樣本基質(zhì)干擾較大，無法一次檢測多種水溶性維生素。分子熒光法檢測靈敏度較紫外分光光度法高，可聯(lián)合檢測多種水溶性維生素，但由于光譜重疊等問題，存在較強的檢測干擾性，檢測準確性和穩(wěn)定性有待提高。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測準確，重現(xiàn)性好，可一次檢測多種水溶性維生素，檢測效率高，成本低。

目前水溶性維生素常見檢測指標為硫胺素、核黃素、吡哆酸、葉酸和泛酸這5項。煙酸、生物素、鈷胺素和維生素C常為單獨檢測項目。因此，需要更全面的了解水溶性維生素的含量，必須進行多次檢測，耗時長、效率低，且成本較高。雖然液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法理論上能夠同時檢測多種水溶性維生素，但是，在實際應用中能夠混合檢測的維生素數(shù)量有限，仍然需要多次檢測才能更完整的獲得維生素含量信息，不能很好的滿足多種維生素同時檢測的使用需求。

發(fā)明內(nèi)容

本申請的目的是提供一種改進的同時檢測11種維生素的方法和試劑盒。

為了實現(xiàn)上述目的，本申請采用了以下技術(shù)方案：

本申請的一方面公開了一種同時檢測11種維生素的方法，本申請的11種維生素包括硫胺素、核黃素、煙酸、煙酰胺、泛酸、吡哆酸、吡哆醇、生物素、5-甲基四氫葉酸、鈷胺素和維生素C；本申請的方法包括，在采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測待測樣品時，使用改進的水相和有機相；該水相由濃度0.1％的甲酸、濃度2.0-5.0mM的乙酸銨和水組成；該有機相由濃度0.1％的甲酸、濃度2.0-5.0mM的乙酸銨和有機溶劑組成。

其中，硫胺素即維生素B1，縮寫VB1；核黃素即維生素B2，縮寫VB2；煙酸即維生素B3，縮寫VB3；煙酰胺縮寫VB3N；泛酸即維生素B5，縮寫VB5；吡哆酸縮寫VB6PA；吡哆醇縮寫VB6PN；生物素即維生素B7，縮寫VB7；5-甲基四氫葉酸縮寫VB9MTHF；鈷胺素即維生素B12，縮寫VB12；維生素C縮寫VC。