[發(fā)明專利]同步測定樣品中血管緊張素I和醛固酮的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010918000.5
• 申請日: 2020-09-03
• 公開（公告）號(hào): CN112014509A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭瑋;潘柏申;李國慶;王蓓麗;陳方俊;彭穎斐;黃超;劉丹;王真昕;胡玉懿;程子韻;張曦;溫冬
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院;上海愛博才思分析儀器貿(mào)易有限公司;駿實(shí)生物科技（上海）有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 錢文宇

本文涉及同步測定樣品中血管緊張素I和醛固酮的方法。具體地，本文提供一種同步測定樣品中血管緊張素I(Ang I)和醛固酮(Ald)含量的方法，包括：(a)固相萃取處理樣品；和(b)通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析經(jīng)(a)處理的樣品，確定其中Ang I的量與Ald的量；其中，所述質(zhì)譜采用正離子模式和負(fù)離子模式切換的方式掃描。本文還提供用于同步測定樣品中血管緊張素I和醛固酮含量的系統(tǒng)，以及獲得樣品中醛固酮含量與腎素活性比值(ARR)的方法及系統(tǒng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明一般涉及樣品中血管緊張素I和醛固酮的測定；具體地，涉及通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行樣品中血管緊張素I和醛固酮的同步測定。

背景技術(shù)

中國高血壓患者總?cè)藬?shù)已突破3.3億，按病因可分為原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓。其中原發(fā)性醛固酮增多癥(primary aldosteronism，PA)是繼發(fā)性高血壓中最常見的病因，在年輕高血壓人群中約占10％。PA臨床表現(xiàn)為高血壓和(或)低血鉀的臨床綜合征，其為一種“可治愈的高血壓”，若能早期篩查診斷，通過手術(shù)或藥物治療使血壓回到正常水平，則可降低患者心血管事件的發(fā)生率，改善患者預(yù)后。

腎素是由腎小球旁器釋放的一種蛋白水解酶，能催化肝臟分泌進(jìn)入血漿中的血管緊張素原轉(zhuǎn)變成血管緊張素I(Ang I)，從而增加醛固酮(Ald)的生成。醛固酮是由腎上腺皮質(zhì)球狀帶分泌的鹽皮質(zhì)激素，主要生理功能是保鈉排鉀，通過調(diào)節(jié)血容量維持體液水鹽平衡。臨床上推薦使用醛固酮/腎素活性比值(ARR)作為PA的初篩方法，再使用生理鹽水抑制試驗(yàn)、開博通試驗(yàn)等作為確認(rèn)試驗(yàn)。在這些臨床實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)確檢測腎素活性－醛固酮濃度至關(guān)重要。

血漿腎素活性水平非常低，僅為ng級(jí)，醛固酮更低，為pg級(jí)，對檢測方法的靈敏度要求很高。放射免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測直接腎素濃度是目前臨床常用的兩種腎素檢測方法。免疫法可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作，檢測快速、成本低，但單次僅能檢測一種靶標(biāo)激素，特異性差、尤其是女性患者易出現(xiàn)交叉反應(yīng)。內(nèi)分泌激素水平在機(jī)體病理狀態(tài)下波動(dòng)范圍大，易出現(xiàn)極高/低值，而免疫分析法在此類情況下準(zhǔn)確性與重復(fù)性的不足，令其在功能性試驗(yàn)中無法正確反映患者的激素水平動(dòng)態(tài)波動(dòng)，從而影響臨床診斷的靈敏度及特異性。

已有的用于PA篩查的質(zhì)譜檢測方法僅適用于對單一目標(biāo)物質(zhì)的分別測定，且前處理操作復(fù)雜，或致力于檢測其它指標(biāo)。目前還沒有關(guān)于同步檢測血漿中Ang I和Ald的報(bào)道。這主要是由于這兩個(gè)化合物在體內(nèi)的含量極低，樣品往往存在干擾，且檢測模式不同(正離子、負(fù)離子)對前處理和LC-MS/MS方法的要求嚴(yán)格。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明開發(fā)并建立了質(zhì)譜技術(shù)同步檢測Ang I和Ald的方法和系統(tǒng)，能夠結(jié)合多重反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜平臺(tái)準(zhǔn)確定量腎素活性，早期快速篩查PA，從而能夠更好地為臨床提供有效、準(zhǔn)確的信息，為快速篩查診斷PA創(chuàng)造條件。本發(fā)明的技術(shù)方案便于大規(guī)模、高通量地操作，具有高靈敏度、高準(zhǔn)確度和高特異性。

一方面，本文提供一種同步測定樣品中血管緊張素I(Ang I)和醛固酮(Ald)含量的方法，包括：

(a)固相萃取處理樣品；和

(b)通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析經(jīng)(a)處理的樣品，確定其中Ang I的量與Ald的量；

其中，所述質(zhì)譜采用正離子模式和負(fù)離子模式切換的方式掃描。

另一方面，本文提供一種用于同步測定樣品中血管緊張素I(Ang I)和醛固酮(Ald)含量的系統(tǒng)，包括：

(i)固相萃取模塊，其具有固相萃取裝置和用于固相萃取裝置的試劑；和

(ii)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜模塊，其具有配備有色譜柱的液相色譜分析裝置，和串聯(lián)質(zhì)譜分析裝置，其中所述液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜模塊經(jīng)配置以分析經(jīng)固相萃取模塊處理的樣品，用于確定其中Ang I的量與Ald的量；