[發明專利]同步測定樣品中血管緊張素I和醛固酮的方法

在審

• 申請號: 202010918000.5
• 申請日: 2020-09-03
• 公開（公告）號: CN112014509A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 郭瑋;潘柏申;李國慶;王蓓麗;陳方俊;彭穎斐;黃超;劉丹;王真昕;胡玉懿;程子韻;張曦;溫冬
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫院;上海愛博才思分析儀器貿易有限公司;駿實生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 錢文宇

本文涉及同步測定樣品中血管緊張素I和醛固酮的方法。具體地，本文提供一種同步測定樣品中血管緊張素I(Ang I)和醛固酮(Ald)含量的方法，包括：(a)固相萃取處理樣品；和(b)通過液相色譜串聯質譜分析經(a)處理的樣品，確定其中Ang I的量與Ald的量；其中，所述質譜采用正離子模式和負離子模式切換的方式掃描。本文還提供用于同步測定樣品中血管緊張素I和醛固酮含量的系統，以及獲得樣品中醛固酮含量與腎素活性比值(ARR)的方法及系統。

技術領域

本發明一般涉及樣品中血管緊張素I和醛固酮的測定；具體地，涉及通過液相色譜-串聯質譜法進行樣品中血管緊張素I和醛固酮的同步測定。

背景技術

中國高血壓患者總人數已突破3.3億，按病因可分為原發性和繼發性高血壓。其中原發性醛固酮增多癥(primary aldosteronism，PA)是繼發性高血壓中最常見的病因，在年輕高血壓人群中約占10％。PA臨床表現為高血壓和(或)低血鉀的臨床綜合征，其為一種“可治愈的高血壓”，若能早期篩查診斷，通過手術或藥物治療使血壓回到正常水平，則可降低患者心血管事件的發生率，改善患者預后。

腎素是由腎小球旁器釋放的一種蛋白水解酶，能催化肝臟分泌進入血漿中的血管緊張素原轉變成血管緊張素I(Ang I)，從而增加醛固酮(Ald)的生成。醛固酮是由腎上腺皮質球狀帶分泌的鹽皮質激素，主要生理功能是保鈉排鉀，通過調節血容量維持體液水鹽平衡。臨床上推薦使用醛固酮/腎素活性比值(ARR)作為PA的初篩方法，再使用生理鹽水抑制試驗、開博通試驗等作為確認試驗。在這些臨床實驗中，準確檢測腎素活性－醛固酮濃度至關重要。

血漿腎素活性水平非常低，僅為ng級，醛固酮更低，為pg級，對檢測方法的靈敏度要求很高。放射免疫法和化學發光法檢測直接腎素濃度是目前臨床常用的兩種腎素檢測方法。免疫法可實現自動化操作，檢測快速、成本低，但單次僅能檢測一種靶標激素，特異性差、尤其是女性患者易出現交叉反應。內分泌激素水平在機體病理狀態下波動范圍大，易出現極高/低值，而免疫分析法在此類情況下準確性與重復性的不足，令其在功能性試驗中無法正確反映患者的激素水平動態波動，從而影響臨床診斷的靈敏度及特異性。

已有的用于PA篩查的質譜檢測方法僅適用于對單一目標物質的分別測定，且前處理操作復雜，或致力于檢測其它指標。目前還沒有關于同步檢測血漿中Ang I和Ald的報道。這主要是由于這兩個化合物在體內的含量極低，樣品往往存在干擾，且檢測模式不同(正離子、負離子)對前處理和LC-MS/MS方法的要求嚴格。

發明內容

本發明開發并建立了質譜技術同步檢測Ang I和Ald的方法和系統，能夠結合多重反應監測技術，利用液相色譜串聯質譜平臺準確定量腎素活性，早期快速篩查PA，從而能夠更好地為臨床提供有效、準確的信息，為快速篩查診斷PA創造條件。本發明的技術方案便于大規模、高通量地操作，具有高靈敏度、高準確度和高特異性。

一方面，本文提供一種同步測定樣品中血管緊張素I(Ang I)和醛固酮(Ald)含量的方法，包括：

(a)固相萃取處理樣品；和

(b)通過液相色譜串聯質譜分析經(a)處理的樣品，確定其中Ang I的量與Ald的量；

其中，所述質譜采用正離子模式和負離子模式切換的方式掃描。

另一方面，本文提供一種用于同步測定樣品中血管緊張素I(Ang I)和醛固酮(Ald)含量的系統，包括：

(i)固相萃取模塊，其具有固相萃取裝置和用于固相萃取裝置的試劑；和

(ii)液相色譜串聯質譜模塊，其具有配備有色譜柱的液相色譜分析裝置，和串聯質譜分析裝置，其中所述液相色譜串聯質譜模塊經配置以分析經固相萃取模塊處理的樣品，用于確定其中Ang I的量與Ald的量；