[發明專利]一種利用天然海水篩選藜麥耐鹽種質的方法

在審

• 申請號: 202010917060.5
• 申請日: 2020-09-03
• 公開（公告）號: CN112005657A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 閆慧芳;王增裕;孫娟;逄文慧
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A01C1/02
• 分類號: A01C1/02;A01G22/00
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為

1.一種利用天然海水篩選藜麥耐鹽種質的方法，所述方法，包括以下步驟：

步驟1，種子材料收集

選擇“隴藜1號、隴藜3號、隴藜4號、YL(非品種名稱)”種子材料，并以胚根突破種皮至少2mm為標準計算種子發芽率的方法來判定種子活力水平，將高活力水平(標準發芽率100％)的藜麥種子作為該技術的材料；

步驟2，種子精選

種子材料收集后，于實驗室內手動篩選無破損、大小一致、成熟飽滿的種子，保存于-20℃冰箱內，以備試驗所；

步驟3，天然海水系列濃度梯度溶液配制

天然海水取自山東省青島市紅島地區(N36°13′7″、E120°8′9″)，將其設置一系列濃度梯度，分別為0％、20％、40％、60％、70％、80％、90％和100％，并配制成相應濃度的溶液；

步驟4，溶液理化性質測定#

對天然海水系列濃度梯度溶液進行pH值和電導率值的測定；

步驟5，種子萌發試驗#

以精選后的藜麥種子為材料，天然海水系列濃度梯度溶液為萌發介質，測定不同藜麥種子萌發過程耐鹽性；#

步驟6，種子萌發特性與耐鹽性分析

以胚根突破種皮至少2mm為標準判定種子萌發，統計萌發種子數，并計算種子萌發特性相關指標與耐鹽相關指標；

步驟7，適宜篩選耐鹽種質的天然海水濃度確定

根據不同藜麥種子在天然海水脅迫下萌發特性相關指標與耐鹽相關指標的變化，結合統計學分析，確定藜麥種子萌發的天然海水適宜濃度條件；

步驟8，耐鹽材料篩選與確定

通過比較天然海水脅迫下不同藜麥種子耐鹽性差異，篩選確定藜麥耐鹽材料。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟1，種子材料收集

該環節需要收集不同的藜麥種子材料。選用初始活力水平高的種子作為試驗樣品，比較其在天然海水脅迫下萌發特性與耐鹽指標的變化，以確定藜麥耐鹽種質篩選的天然海水適宜濃度和耐鹽材料。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟3，天然海水系列濃度梯度溶液配制

天然海水脅迫濃度是影響種子萌發特性和耐鹽指標變化的重要因素。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟4，溶液理化性質測定

不同濃度天然海水溶液理化性質這一基礎數據對藜麥耐鹽種質篩選研究非常重要。

5.根據權利要求1所述的方法，步驟如下：

步驟1，種子材料收集

為確保藜麥耐鹽種質篩選研究與應用的實用性，以胚根突破種皮至少2mm為標準計算發芽率的方法來判定種子活力水平，選用發芽率100％的藜麥種子作為供試材料；

步驟2，種子精選

為保證研究結果的精確性，排除由于種子質量不均勻造成的誤差，本發明精選無破損、大小一致、成熟飽滿的種子進行試驗；

步驟3，天然海水系列濃度梯度溶液配制

按照0％、20％、40％、60％、70％、80％、90％和100％的系列濃度梯度，分別計算出配制各濃度溶液所對應的天然海水及蒸餾水的體積。用量筒量取對應體積的天然海水和蒸餾水，混合均勻，配制成不同濃度溶液；

步驟4，溶液理化性質測定

分別用pH計和電導率儀測定上述各濃度溶液的pH值和電導率值。將電極清洗并用濾紙吸干，插入到待測溶液中，待pH計或電導率儀顯數穩定時，讀數并記錄。測定電導率時，若讀數超過電導率儀的最大測量量程，需將溶液稀釋一定倍數后，再次重新測定；

步驟5，種子萌發試驗

精選無破損、大小一致、成熟飽滿的藜麥種子50粒，將其擺放入盛有3層濾紙的110mm×110mm有蓋培養皿中，濾紙分別用10mL各濃度天然海水潤濕，蒸餾水潤濕的作對照。每個處理3次重復。將培養皿置于光照培養箱(GXZ-380B-LED)中在25℃恒溫黑暗條件下培養，每12h觀察種子萌發情況，以胚根突破種皮至少2mm為標準判定種子萌發，統計萌發種子數，直至萌發7d；

步驟6，種子萌發特性與耐鹽性分析

按照公式分別計算藜麥種子的平均發芽時間(MGT)、發芽勢(GE)、發芽率(GP)、發芽指數(GI)、耐鹽指數(STI)、相對鹽害率(RSDR)；

MGT(days)＝Σnt/Σn，n為時間t新萌發種子數，t為從種子擺盤到計數時的天數，Σn為全部萌發種子總數；

GE(％)＝(第3天萌發的種子數/供試種子總數)×100％；

GP(％)＝(n/N)×100％，n為前7天全部萌發種子總數，N為供試種子總數；

GI＝Σ(Gt/Dt)，Gt為t天內的發芽數，Dt為相應的發芽天數；

STI＝Σ(GP+GE+GI)/mn，m為計算指標項數，n為鹽濃度梯度個數；

RSDR(％)＝(對照萌發率-處理萌發率)/對照萌發率×100％；

試驗數據采用Excel 2010和SPSS17.0軟件進行顯著性統計分析，采用SigmaPlot10.0軟件作圖。結果以平均值±標準誤表示；

步驟7，適宜篩選耐鹽種質的天然海水濃度確定

根據種子萌發特性相關指標與耐鹽相關指標結果變化，將具有顯著差異的拐點所對應的脅迫濃度確定為藜麥種子耐鹽萌發的天然海水適宜濃度條件；

步驟8，耐鹽材料篩選與確定

根據不同藜麥種子材料在天然海水脅迫下的耐鹽性差異比較，篩選出藜麥耐鹽材料。