[發明專利]含有枯草芽孢桿菌的復合微生態制劑及其應用

有效

• 申請號: 202010915226.X
• 申請日: 2020-09-03
• 公開（公告）號: CN112251370B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 王云爽;易敢峰;王亞如;付維來;周志剛
• 申請（專利權）人: 福建大北農華有水產科技集團有限公司;北京大北農科技集團股份有限公司;江蘇大北農水產科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/18;A23K20/163;A23K50/80;A61K35/742;A61P31/04;C12R1/125;A61K31/722;A61K31/702
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本發明公開了一種含有枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)的復合微生態制劑及其在抑制水產病原弧菌中的應用，屬于水產微生態領域。本發明將篩選到的枯草芽孢桿菌發酵液和殼寡糖配合，對水產病原弧菌：鰻弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等具有良好的抑制作用，抑制作用顯著高于單株枯草芽孢桿菌11#或者單獨的殼寡糖，具有明顯的協同效果。

技術領域

本發明屬于水產微生態領域，特別涉及一種含有枯草芽孢桿菌的?復合微生態制劑及其應用。

背景技術

弧菌病是由弧菌屬細菌引起的一類細菌性疾病，該病在全世界范?圍內廣泛發生，其發病率高，危害大，不僅給對蝦還給魚類、貝類、?其他甲殼類等海水養殖生物造成危害。弧菌病的防治一般采用細菌素?和消毒劑等化學類藥物治療，但藥物殘留和抗藥性易造成環境污染，?給人類帶來危害。應用較多的噬菌蛭弧菌類制劑已被明令禁止，人們?開始探索更多可以用于弧菌防治的有益菌。

微生態制劑在改善動物機體健康，促進動物生長，提高動物免疫?力，改善調節水質等方面具有良好作用，同時，其綠色環保、無毒副?作用、無殘留污染等優點使其成為抗生素最有潛力的替代品。芽孢桿?菌類(Bacillus.sp)細菌具有抗逆性好，生長迅速，適應能力強大能?夠產生豐富多樣的抗菌物質等優點，是一種理想的益生菌篩選對象。

免疫增強劑可以提高動物免疫能力的制劑，或調節動物免疫系統?并激活免疫功能、增強機體對細菌和病毒等傳染性病原體抵抗能力，?目前研究和應用最多的是多糖類和寡糖類這兩大類功能性糖類。殼寡?糖是一種具有水溶性好、調節腸道微生態，增強免疫力的新型免疫增?強劑，且相較于其他寡糖，其在較低使用濃度下就具有較好的抑菌能?力，已被廣泛應用于食品工業和畜牧業生產，但在水產上的應用及研?究較少。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種含有枯草芽孢桿菌的復合微?生態制劑及其應用

首先，本發明提供一種枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)菌株，?其保藏編號為CGMCC?No.12194。

本發明的枯草芽孢桿菌分離自南美白對蝦養殖池塘底泥及水體，?利用細菌的通用引物對篩選到的菌株進行PCR鑒定：按細菌DNA提?取試劑盒操作說明書提取模板DNA。使用16S?rRNA保守序列的上?游引物5’-AGAGTT?TGA?TCC?TGG?CTC?AG-3’(SEQ?ID?No.2)和下游引物5’-GGT?TACCTT?GTT?ACG?ACT?T-3’(SEQ?ID?No.3)擴增細?菌16s?rRNA基因片段。經過測序得到該菌屬于枯草芽孢桿菌?(Bacillus?subtilis)。

將篩選到的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)命名為11#，于2016?年3月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，?地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，?保藏編號為：CGMCC?No.12194。

本發明還提供所述枯草芽孢桿菌的發酵方法，采用液體發酵培養?基，培養基組成：蔗糖15-25g/L，酵母粉0.5-1.5g/L，磷酸二氫鉀?0.5-1.5g/L，L-谷氨酸鈉3-8g/L，七水合硫酸鎂0.5g/L，氯化鉀0.5?g/L，硫酸錳5.2×10^-3g/L，七水合硫酸銅0.15×10^-3g/L，七水合硫?酸亞鐵0.17×10^-3g/L；發酵條件：溫度28-40℃，攪拌速率50-150r/min，?通氣比：1:0.35，培養時間16-24h，培養密度為1.0×10⁸～10⁹cfu/mL。

本發明還提供一種水產微生態制劑，其含有所述的枯草芽孢桿菌?和殼寡糖。

優選的，所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌的發酵液。更優選的，?所述的枯草芽孢桿菌的發酵液根據前述的發酵方法制備。