[發(fā)明專利]一種靶向ROR2的嵌合抗原受體、表達(dá)基因、表達(dá)載體、T細(xì)胞及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010914145.8
• 申請日: 2020-09-01
• 公開（公告）號: CN112048021A
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張素平;王亦萌;李正皓;何超;張悅
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 深圳市世紀(jì)恒程知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 44287
• 代理人: 薛福玲

本發(fā)明提供一種靶向ROR2的嵌合抗原受體、表達(dá)基因、表達(dá)載體、T細(xì)胞及其應(yīng)用，通過構(gòu)建包括連接的信號肽序列、抗ROR2的單鏈抗體區(qū)、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)、共刺激因子結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)信號域的抗ROR2的嵌合抗原受體，并制備靶向ROR2的CAR?T細(xì)胞，在細(xì)胞和動物實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證了其對表達(dá)ROR2的腫瘤的治療效果顯著。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種靶向ROR2的嵌合抗原受體、表達(dá)基因、表達(dá)載體、T細(xì)胞及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

嵌合抗原受體T細(xì)胞(Chimeric antigen receptor T cell，CAR-T)療法是一種新興的治療惡性腫瘤的方法，其在部分種類的白血病及淋巴瘤的治療中有著極高的治愈率。2017年，美國FDA已經(jīng)批準(zhǔn)了2款CAR-T細(xì)胞療法上市，然而目前比較成熟的CAR-T細(xì)胞療法主要以B細(xì)胞表面標(biāo)志物CD19為靶點(diǎn)，因此使用該療法所能夠治療的腫瘤的類型也受到很大程度的制約。目前，許多研究在開發(fā)新的適合CAR-T細(xì)胞療法的靶點(diǎn)，以期能夠?qū)AR-T細(xì)胞療法應(yīng)用到更為廣闊的腫瘤類型中。

受體酪氨酸激酶樣孤兒受體2(receptor tyrosine kinase-like orphan receptor-2，ROR2)是重要的發(fā)育相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白，在胚胎發(fā)育早期，多種組織中均有較高的表達(dá)，對組織的增殖、分化等具有重要的作用。妊娠中期后，ROR2的表達(dá)水平逐漸下降，除了在部分成骨細(xì)胞和子宮細(xì)胞之外，ROR2在健康成人組織中基本不表達(dá)。

目前研究表明，ROR2在許多腫瘤組織中高表達(dá)，包括骨肉瘤，黑色素瘤，結(jié)直腸癌，胃癌，乳腺癌等癌癥，并且，ROR2表達(dá)水平越高的癌細(xì)胞，其惡性程度越高，越容易發(fā)生轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，預(yù)后越差。因此，許多學(xué)者認(rèn)為ROR2是一種腫瘤相關(guān)基因，可以作為理想的藥物靶點(diǎn)。然而，目前尚無靶向ROR2的CAR-T細(xì)胞療法在惡性腫瘤的治療中進(jìn)行應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是提供一種靶向ROR2的嵌合抗原受體，旨在構(gòu)建針對高表達(dá)ROR2的腫瘤的CAR-T細(xì)胞療法，并對其在對惡性腫瘤治療中的有效性及安全性進(jìn)行評估。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明第一方面提出一種抗ROR2的嵌合抗原受體，包括抗ROR2的單鏈抗體，所述抗ROR2的單鏈抗體包括下列至少之一：

(1)具有CSASSSVSYMHWYQ、IYDTSKLAS和CQQWSSNPPTFGAG所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，以及具有YTITSYLMHWV、LEWIGYINPYN DGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；

(2)具有CSASSSVTYTYWYQ、IYDTSNLAS和CQQWSSYPFTFGSG所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，以及具有YTFTSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；

或與(1)或(2)相比，具有至少一個保守氨基酸取代的氨基酸序列；

任選地，所述抗ROR2的單鏈抗體包括下列至少之一：

(a)具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；

(b)具有SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；

或與(a)或(b)相比，具有至少一個保守氨基酸取代的氨基酸序列。

在其中一實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體包括連接的信號肽序列、抗ROR2的單鏈抗體區(qū)、跨膜區(qū)、共刺激因子結(jié)構(gòu)域以及膜內(nèi)信號域；其中

所述抗ROR2的單鏈抗體區(qū)包括一段氨基酸連接肽連接所述抗ROR2的單鏈抗體重鏈可變區(qū)和所述抗ROR2的單鏈抗體輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列；