[發(fā)明專利]一種全自動(dòng)核酸檢測方法及試管

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010912475.3
• 申請(qǐng)日: 2020-09-03
• 公開（公告）號(hào): CN111876468B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵光業(yè);請(qǐng)求不公布姓名;請(qǐng)求不公布姓名
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州天微基因科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806;C12Q1/6844;C12M1/34;C12M1/24;C12M1/00;G01N35/00
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本發(fā)明公開了一種全自動(dòng)核酸檢測方法及試管，通過將分別裝有裂解液、清洗液和反應(yīng)液的腔體呈水平排布并在側(cè)面進(jìn)行連通，分別在腔體之間設(shè)置固相或液相的疏水物質(zhì)，從而將裂解液、清洗液和反應(yīng)液進(jìn)行隔離；將樣品加入裝有裂解液的腔體內(nèi)進(jìn)行混勻裂解，并利用納米磁珠進(jìn)行核酸提取，在試管外側(cè)利用外部磁體控制試管內(nèi)的納米磁珠，依次通過清洗液腔體，反應(yīng)液腔體，最終在反應(yīng)液腔體進(jìn)行擴(kuò)增，其中，反應(yīng)液所需生物試劑儲(chǔ)存在疏水物質(zhì)中，通過磁珠帶入反應(yīng)液中，核酸擴(kuò)增過程中通過外部光學(xué)檢測設(shè)備進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測，從而實(shí)現(xiàn)核酸提取擴(kuò)增檢測的一體化。本發(fā)明整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程通過設(shè)備全自動(dòng)完成提取擴(kuò)增檢測，極大地簡化了實(shí)驗(yàn)操作難度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于體外診斷核酸檢測領(lǐng)域，涉及一種全自動(dòng)核酸檢測方法及試管。

背景技術(shù)

磁珠法核酸提取原理是依據(jù)與硅膠膜離心柱相同的原理，運(yùn)用納米技術(shù)對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后，制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合。利用二氧化硅包被的納米磁性微球的超順磁性，在Chaotropic鹽（鹽酸胍、異硫氰酸胍等）和外加磁場的作用下，能從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA，可應(yīng)用在臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、分子生物學(xué)研究等多個(gè)領(lǐng)域。

核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)是通過為核酸片段提供體外擴(kuò)增的條件，使之成指數(shù)大量擴(kuò)增并在核酸擴(kuò)增過程中加入熒光染料或熒光標(biāo)記物，采用光學(xué)裝置檢測出熒光信號(hào)的強(qiáng)弱，通過對(duì)熒光信號(hào)的處理分析得出核酸擴(kuò)增結(jié)果的過程。

從核酸提取到擴(kuò)增檢測中間包含裂解、清洗、洗脫、擴(kuò)增等步驟，目前主流技術(shù)必須要求在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室中分步進(jìn)行，整個(gè)過程容易對(duì)樣本核酸造成污染，操作難度大，對(duì)操作人員要求高，不利于核酸檢測技術(shù)的推廣。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種全自動(dòng)核酸檢測方法及試管，極大地簡化了從核酸提取到擴(kuò)增的操作難度，提高了檢測效率，有效避免環(huán)境對(duì)樣本的污染，提高檢測準(zhǔn)確度。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種全自動(dòng)核酸檢測方法，通過將分別裝有裂解液、清洗液和反應(yīng)液的腔體呈水平排布并在側(cè)面進(jìn)行連通，分別在腔體之間設(shè)置固相或液相的疏水物質(zhì)，從而將裂解液、清洗液和反應(yīng)液進(jìn)行隔離；將樣品加入裝有裂解液的腔體內(nèi)進(jìn)行混勻裂解，并利用納米磁珠進(jìn)行核酸提取，在試管外側(cè)利用外部磁體控制試管內(nèi)的納米磁珠，依次通過清洗液腔體，反應(yīng)液腔體，最終在反應(yīng)液腔體進(jìn)行擴(kuò)增，其中，反應(yīng)液所需生物試劑儲(chǔ)存在疏水物質(zhì)中，通過磁珠帶入反應(yīng)液中，核酸擴(kuò)增過程中通過外部光學(xué)檢測設(shè)備進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測，從而實(shí)現(xiàn)核酸提取擴(kuò)增檢測的一體化。

前述的一種全自動(dòng)核酸檢測方法中，所述反應(yīng)液所需生物試劑由疏水物質(zhì)密封保存，通過外部設(shè)備對(duì)疏水物質(zhì)進(jìn)行加熱融化從而釋放生物試劑。

前述的一種全自動(dòng)核酸檢測方法中，所述外部光學(xué)檢測設(shè)備檢測孔設(shè)置反應(yīng)液腔體的側(cè)面。

前述的一種全自動(dòng)核酸檢測方法中，所述反應(yīng)液腔的底部設(shè)置有外部磁體，用于吸附磁珠來減少磁珠對(duì)熒光信號(hào)的干擾。

一種全自動(dòng)核酸檢測試管，包括：主管體、環(huán)形管槽、錐形管體、翻蓋；所述主管體、環(huán)形管槽、錐形管體的通過側(cè)面連通；所述主管體為裂解液區(qū)；所述環(huán)形管槽為清洗區(qū)；所述錐形管體為反應(yīng)區(qū)。

前述的全自動(dòng)核酸檢測試管中，所述主管體的頂部設(shè)置有開口用于裝入樣本。

前述的全自動(dòng)核酸檢測試管中，所述環(huán)形管槽的兩側(cè)設(shè)置有疏水物質(zhì)。

前述的全自動(dòng)核酸檢測試管中，所述錐形管體的底部為錐形透明管用于檢測熒光信號(hào)。

前述的全自動(dòng)核酸檢測試管中，所述翻蓋設(shè)置在主管體的頂部。