[發(fā)明專利]一種與乳腺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白/基因IFI30的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010911207.X
• 申請(qǐng)日: 2020-09-02
• 公開（公告）號(hào): CN112226508A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余之剛;郭明明;相玉娟;葉春淼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 余之剛
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;G01N33/574;A61K45/00;A61K48/00;A61K38/17;A61P35/00;A61P15/14
• 代理公司: 濟(jì)南舜昊專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 37249
• 代理人: 宋玉霞

1.一種與乳腺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白/基因IFI30的應(yīng)用，其特征在于，

具體為，通過(guò)改變IFI30表達(dá)水平的試劑在評(píng)價(jià)乳腺癌進(jìn)展、預(yù)后及治療反應(yīng)性產(chǎn)品中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，IFI30在制備乳腺癌分子分型標(biāo)志物中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，IFI30在制備乳腺癌IFI30表達(dá)強(qiáng)度免疫組化檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的試劑盒，是通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)生物樣品中IFI30的表達(dá)情況；優(yōu)選的，所述的試劑盒，包括：特異性識(shí)別人IFI30的抗體、免疫組化實(shí)驗(yàn)試劑；優(yōu)選的，所述的生物樣品，為病人乳腺癌的石蠟包埋組織。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的乳腺癌分子分型試劑盒的檢測(cè)方法，具體步驟如下：

步驟1.脫蠟至水

(1)4μm厚石蠟切片，每個(gè)腫瘤組織2張連續(xù)切片，60℃烤箱烤1h；

(2)二甲苯10min x 3次；

(3)依次經(jīng)過(guò)100％乙醇、95％乙醇、85％乙醇、75％乙醇、雙蒸水，各5min；

步驟2.抗原修復(fù)

(1)3％H₂O₂甲醇液20min；

(2)雙蒸水洗5minx 3次；

(3)抗原修復(fù)(高壓修復(fù))：

切片放入盛有EDTA堿性修復(fù)液(2mM EDTA、2mM Na₂HPO₄)的高壓鍋中，高壓煮沸2min，自然冷卻至室溫；

步驟3.一抗孵育

(1)PBS洗5min；

(2)50μl 1％BSA覆蓋組織，37℃封閉30min；

(3)吸去封閉液，分別滴加IFI30一抗50μl，濕盒中4℃孵育過(guò)夜；

步驟4.二抗孵育

(1)吸走一抗，PBS洗5minx 4次；

(2)滴加50μl帶HRP標(biāo)記的二抗，37℃孵育30-45min；

步驟5.顯色、反藍(lán)

(1)PBS洗5minx 4次；

(2)DAB(1:50)顯色3-10min，至出現(xiàn)磚紅色沉淀，雙蒸水終止顯色；

(3)蘇木素復(fù)染10min，鹽酸酒精分化后自來(lái)水沖洗反藍(lán)20-30min；

步驟6.脫水封片

依次經(jīng)過(guò)雙蒸水、75％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、100％乙醇、石炭酸、二甲苯，各5min。滴加樹脂封片；

步驟7.觀察評(píng)價(jià)和評(píng)分

由2名病理科醫(yī)生對(duì)染色后切片進(jìn)行評(píng)價(jià)，顯微鏡下觀察乳腺癌細(xì)胞IFI30的表達(dá)水平。2名病理科醫(yī)生在不明確患者任何臨床信息的前提下以“背靠背”的方式進(jìn)行，依據(jù)改良的Harvey評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)染色結(jié)果。評(píng)分結(jié)果分為兩部分：IFI30染色強(qiáng)度IFI30染色陽(yáng)性細(xì)胞比例。染色強(qiáng)度分為0(細(xì)胞未著色)、1+(細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)淺棕色)、2+(細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)中等程度著色)和3+(細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)深棕色)分別記為0分、1分、2分和3分。統(tǒng)計(jì)乳腺癌細(xì)胞IFI30染色陽(yáng)性的比例，按照陽(yáng)性細(xì)胞比例分為0分(無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞)、1分(＜1/100細(xì)胞特異性染色)、2分(1/100-1/10細(xì)胞特異性染色)、3分(1/10-1/3細(xì)胞特異性染色)、4分(1/3-2/3細(xì)胞特異性染色)和5分(＞2/3細(xì)胞特異性染色)。最終得到染色范圍得分、染色強(qiáng)度得分和兩者總分。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，具體為，上述檢測(cè)乳腺癌組織中IFI30表達(dá)水平的試劑盒在制備乳腺癌分子分型試劑盒中的應(yīng)用；優(yōu)選的，該乳腺癌分子分型試劑盒，用于檢測(cè)乳腺癌組織中IFI30表達(dá)水平；優(yōu)選的，所述的乳腺癌分子分型試劑盒通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)生物樣品中IFI30的表達(dá)情況；優(yōu)選的，所述的乳腺癌分子分型試劑盒，包括：特異性識(shí)別人IFI30的抗體、免疫組化實(shí)驗(yàn)試劑；優(yōu)選的，所述的生物樣品，為病人乳腺癌的石蠟包埋組織。