[發(fā)明專利]一種提高果蔬采后酸性病原真菌拮抗酵母生物防治效力的方法及應用

在審

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• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN112159767A
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發(fā)明（設計）人: 路來風;張澤華;張浩然;范春陽;孫久云;楊瑩;孫丹丹
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N1/38;A23B7/155;C12R1/645
• 代理公司: 天津盛理知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 劉丹舟

本發(fā)明涉及一種提高果蔬采后酸性病原真菌拮抗酵母生物防治效力的方法，方法步驟包括：⑴活化生防酵母菌；⑵將活化后的生防酵母菌進行液體培養(yǎng)；所述的生防酵母為海洋酵母Rhodosporidium?paludigenum?FellTallman，菌種保藏號為IMI?394084，在培養(yǎng)基中添加有機酸，應用于提高拮抗酵母防治果蔬采后酸性病原真菌的能力，該酸性病原真菌包括：指狀青霉、意大利青霉、擴展青霉、葡萄孢屬的灰葡萄孢、核盤菌，可以有效提升拮抗酵母在不同有機酸脅迫中的存活率，并提升拮抗酵母防治采后病害的能力，安全高效、綠色無污染，符合天然、環(huán)保理念，且由于微生物的生長繁殖速度快，易于規(guī)模化裝備。

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于果蔬采后病害防治領域，涉及拮抗酵母生物防治技術(shù)，尤其是一種提高果蔬采后酸性病原真菌拮抗酵母生物防治效力的方法及應用。

背景技術(shù)

果蔬采后病害主要由病原真菌引起，每年造成我國果蔬產(chǎn)品損失達到數(shù)百億元人民幣，資源與經(jīng)濟損失嚴重。病原真菌不僅會造成果實數(shù)量上的巨大損失，而且許多病原真菌分泌產(chǎn)生的大量次生代謝產(chǎn)物還可能會引起嚴重的食品安全問題，如擴展青霉產(chǎn)生的棒曲霉素等。

引起果蔬采后病害的病原真菌主要有青霉屬、根霉屬、鏈格孢屬、葡萄孢屬和核盤菌屬等，并分為2種類型，即酸性病原真菌和堿性病原真菌。其中，酸性病原真菌占據(jù)采后真菌病害的主體，包括青霉屬的指狀青霉、意大利青霉、擴展青霉等，葡萄孢屬的灰葡萄孢等，以及能感染多種寄主的核盤菌等，造成損失最為嚴重。酸性病原真菌能在其生長、侵染過程中分泌草酸、檸檬酸和葡萄糖醛酸等有機酸，從而使環(huán)境和寄主組織發(fā)生酸化，進而激活其毒性因子，并抑制果皮組織中過氧化氫等抗性信號分子的產(chǎn)生，劫持植物防御反應，進一步增強其致病力。

在眾多被研究的可能替代化學殺菌劑的方法中，利用拮抗微生物，特別是拮抗酵母抑制采后果實病害的生物防治技術(shù)是當前國內(nèi)外最為關注的新型采后病害控制方法之一。酵母菌對低溫、高溫、干燥、低氧水平、pH值波動和紫外線輻射等環(huán)境條件表現(xiàn)出較好的耐受性。不過，低濃度有機酸被證明仍會對酵母生長等造成脅迫，抑制它們的生長，導致延長的滯后期。

目前關于如何增強拮抗酵母在酸性果實傷口處發(fā)揮穩(wěn)定的生物防治效果的研究較少，嚴重限制了定向提高果實生防酵母活性技術(shù)的發(fā)展。目前，提高酵母菌耐酸能力和生物活性能力的方法主要集中于基因工程菌改造方面，而結(jié)合酸性病原真菌毒性因子(草酸、檸檬酸和葡萄糖醛酸等)，通過發(fā)酵工藝優(yōu)化方法有效增強拮抗酵母生物防治效力的研究尚未見有報道。

通過對現(xiàn)有公開專利文獻的檢索，發(fā)現(xiàn)以下幾篇相關公開專利文獻：

1、通過誘導抗性來抑制果實采后病害的方法及所用制劑(公開號CN106085890B)，公開了一種通過誘導抗性來抑制果實采后病害的制劑，該制劑是由海洋紅冬孢酵母細胞壁和水組成，每1L制劑中含有0.1～10g海洋紅冬孢酵母細胞壁。該發(fā)明還同時提供了利用上述制劑進行的通過誘導抗性來抑制果實采后病害的方法，在果實裝箱貯藏前，先進行如下任意一種方式的預處理：預處理方式一、先將果實放入制劑中浸泡，瀝干后放入容器內(nèi)于密封狀態(tài)下保持23～25小時；預處理方式二、果實采摘前，將制劑噴在果實表面，然后放入容器內(nèi)于密封狀態(tài)下保持23～25小時；將上述預處理后的果實從容器中取出后再裝箱。采用本發(fā)明可在不使用化學殺菌劑的前提下能有效控制果實采后病害。

2、一種利用轉(zhuǎn)錄因子Crz1p調(diào)控光滑球擬酵母酸脅迫抗性的方法(公開號：CN105400770B)，公開了一種利用轉(zhuǎn)錄因子Crz1p調(diào)控光滑球擬酵母酸脅迫抗性的方法，屬于生物工程領域。本發(fā)明通過對光滑球擬酵母的Cgcrz1基因進行缺失或者過表達，相應降低或者提高了菌株的酸脅迫抗性。該發(fā)明還比較了缺失突變菌株Cgcrz1Δ在酸脅迫下細胞膜脂肪酸、甾醇成份及比例和通透性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Crz1p是光滑球擬酵母抵御酸脅迫的必需轉(zhuǎn)錄因子，過表達Crz1p可提高光滑球擬酵母酸脅迫抗性。