[發明專利]二氯喹啉酸的超高效液相色譜串聯質譜檢測方法

在審

• 申請號: 202010908233.7
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN111830185A
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 曾維愛;周勇;蔡海林;丁春霞;趙阿娟;劉佳;朱航;翟爭光;謝鵬飛
• 申請（專利權）人: 湖南省煙草公司長沙市公司;湖南省農業生物技術研究所;湖南農業大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 佛山粵進知識產權代理事務所(普通合伙) 44463
• 代理人: 張敏

1.一種檢測煙草中二氯喹啉酸殘留量的超高效液相色譜串聯質譜法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

(1)標準工作溶液的配制：

準確稱取二氯喹啉酸標準品，用甲醇超聲溶解并定容至50mL，得到1000mg/L的母液，再用甲醇配制不同濃度的系列標準溶液；

稱取3.00g經測定不含二氯喹啉酸的空白煙草樣品，加入20mL超純水和30mL提取液(V甲酸：V乙腈＝0.5：99.5)，混勻后，加入5g氯化鈉，渦旋提取5min，4000rmp離心5min，取上清液；

取1.5mL上述上清液放入預先加有100mg十八烷基鍵合硅膠(C18)的離心管中，混勻，11000rmp離心3min，離心后移取上清液至試管。過0.22μm濾膜，得到空白基質提取凈化液；以空白基質提取凈化液為溶劑配制二氯喹啉酸的煙草基質標準工作溶液；

(2)用超高效液相色譜串聯質譜法測定二氯喹啉酸的基質標準工作溶液中農藥組分的提取離子峰面積，以濃度為橫坐標，以提取離子峰面積為縱坐標繪制出二氯喹啉酸的標準工作曲線；

(3)測定煙草樣品中二氯喹啉酸殘留量，檢測方法包括以下步驟：

對煙草樣品進行提取；稱取煙草樣品3.00g，加入20mL超純水，30mL提取液(V甲酸：V乙腈＝0.5：99.5)，繼續加入5g氯化鈉，渦旋提取5min，4000rmp離心3min，取上清液；

對所述待凈化的煙草樣品提取液進行凈化；取1.5mL上述上清液放入預先加有100mgC18的離心管中，渦旋混勻5min，11000rmp離心3min，離心后移取上清液過0.22μm濾膜后，得到用于測定二氯喹啉酸殘留的煙草樣品提取凈化液；

(4)用高效液相色譜串聯質譜法測定所述煙草樣品提取凈化液中的二氯喹啉酸殘留量，記錄提取離子色譜峰面積，基質外標法定量，得到所述煙草樣品提取凈化液中二氯喹啉酸的測定值；再將所述測定值帶入到定量計算公式中，最終得到煙草樣品中待測二氯喹啉酸殘留量；

定量計算公式：R＝(C×V₁×V₃)/m×V₂，式中：R為樣品中農藥的殘留量(mg/kg)；C為根據樣品峰面積經標準曲線或單點定量計算得出樣品進樣濃度(mg/L)；m為稱樣量(g)；V1為提取液體積(mL)；V2為分取液體積(mL)；V3為定容體積(mL)；

步驟(2)和(4)中，所涉及的質譜條件見表1；

表1二氯喹啉酸的質譜條件

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)和(4)中，所涉及的測定條件為：電離源模式：ESI；電離源極性：正；霧化氣：氮氣；鞘氣壓力：276kPa；離子傳輸管溫度：320℃；噴針溫度：300℃；離子噴霧電壓：3500V；色譜柱Hypersil GOLD C18(2.1mm×100mm 1.9μm)，柱溫：35℃；流速：0.3mL/min；進樣量：5μL；流動相B為甲醇溶液，流動相C為0.1％甲酸水溶液(v/v)，梯度洗脫條件見表2(表2中流動相B、C兩種溶劑的比例均為體積比)。

表2梯度洗脫條件

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述的煙草基質混合標準工作溶液中，二氯喹啉酸的濃度范圍是1-1000μg/L。