[發明專利]一種區分鹿皮膠或鹿角膠的特征肽段及其檢測方法

有效

• 申請號: 202010906437.7
• 申請日: 2020-09-01
• 公開（公告）號: CN112098579B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 蔡朔;劉睿;蔣夢彤;趙珂璇;段金廒
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 陸志斌

本發明公開了一種鹿源特征肽段及其檢測方法，本發明通過大量是實驗篩選，研究確定2條鹿源肽段相對含量的比值，并以鹿角膠在混合膠中占比為橫坐標，以A_肽1/A_肽2數值為縱坐標作圖，鹿角膠占比與A_肽1/A_肽2呈線性，建立標準曲線方程為y=4.7903x+0.4106，從而用來區分鹿皮膠與鹿角膠。該方法專屬性強、靈敏度高、操作簡單，可用于鹿皮膠與鹿角膠的區分及質量控制。從而可以克服現有技術中，鹿角膠與鹿皮膠從外觀上難以區分，專屬性肽段也難以區分的不足。對保證含有鹿皮膠或鹿角膠的藥品、保健食品、健康食品等的質量具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種區分鹿皮膠或鹿角膠的特征肽段的檢測方法，具體涉及區分鹿皮膠與鹿角膠，以及鹿角膠中摻有鹿皮膠的樣品、摻入鹿皮膠的比例的特征肽段和檢測方法。

技術背景

膠類藥材包括阿膠、鹿皮膠、鹿角膠、黃明膠等，80％以上的成分為不同類別的膠原蛋白，包括I型膠原α1鏈(COL1A1)、I型膠原α2鏈(COL1A2)、II型膠原α1鏈(COL2A1)、III型膠原α1鏈(COL3A1)等，其中以COL1A2來源的肽段為主。COL1A2作為高保守蛋白質，廣泛存在于不同動物種體內，是構成膠類藥材的重要蛋白類成分之一。

鹿角膠與鹿皮膠均來源于梅花鹿或馬鹿，兩者為名貴膠類中藥材，鹿角膠為梅花鹿或馬鹿角經水煎煮、濃縮制成的固體膠，鹿皮膠為梅花鹿或馬鹿的干燥皮或鮮皮經煎煮、濃縮制成的固體膠。鹿角為馬鹿或梅花鹿已骨化的角，價格遠高于鹿皮，市場上存在以鹿皮膠摻入鹿角膠以次充好的現象。如何將鹿皮膠與鹿角膠進行區分，著實是膠類藥材鑒定研究的難題，給鹿角膠與鹿皮膠鑒別，以及鹿角膠摻入鹿皮膠的偽品鑒別都帶來了挑戰。

鹿角膠與鹿皮膠從外觀上難以區分，且兩者均來源于梅花鹿或馬鹿，其蛋白質組成相同，因此，通過尋找專屬性肽段來區分兩者基本不可能。

發明內容：

發明目的：本發明通過大量實驗篩選，研究確定2條鹿源肽段相對含量的比值，從而用來區分鹿皮膠與鹿角膠。該方法專屬性強、靈敏度高、操作簡單，可用于鹿皮膠與鹿角膠的區分及質量控制。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種區分鹿皮膠或鹿角膠的特征肽段，所述的特征肽為：

肽1：

Gly-Asn-Asp-Gly-Ala-Thr-Gly-Ala-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Phe-Hyp-Gly-Ala-Val-Gly-Ala-Lys；

肽2：

Gly-Asn-Asp-Gly-Ala-Thr-Gly-Ala-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Phe-Pro-Gly-Ala-Val-Gly-Ala-Lys。

一種區分鹿皮膠或鹿角膠的特征肽段的檢測方法，包括以下步驟：

(1)將上述的2個區分鹿皮膠或鹿角膠的特征肽段配成混合對照品溶液；

(2)將待檢測鹿皮膠與鹿角膠樣品，用胰蛋白酶進行酶切后，將酶解液和步驟(1)區分鹿皮膠或鹿角膠的特征肽段混合對照品溶液注入液質聯用儀，以區分鹿皮膠或鹿角膠的特征肽段對照，采用ESI正離子模式，多反應監測模式進行檢測，選擇的離子對包括：肽1：m/z 850.4(三電荷)→515.4、肽2：m/z 845.0(三電荷)→507.3；以肽1峰面積A_肽1與肽2峰面積A_肽2的比值確定樣品為鹿皮膠或是鹿角膠。