[發明專利]一種結腸癌轉移預測方法和系統

在審

• 申請號: 202010906292.0
• 申請日: 2020-09-01
• 公開（公告）號: CN112034182A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 許劍民;丁琛;周鵬揚;朱德祥;韋燁;任黎;莊奧博;林奇;易拓;許平平;常文舉;馮青陽;吉美玲
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

本發明提供一種結腸癌轉移預測方法和系統，通過蛋白質質譜檢測技術，獲取結直腸癌組織學石蠟切片的蛋白質信息，根據具體的蛋白信息納入預測模型中，預測術后結腸癌的轉移發生。

技術領域

本發明涉及蛋白質質譜檢測應用于癌癥預測技術領域，具體涉及一種結腸癌轉移預測方法和系統。

背景技術

結直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一。在西方發達國家，其發病率和死亡率位居腫瘤第3位，全球每年大約110萬新發病例，53萬死亡病例，其中我國每年新發病人數約40萬人，發病數和死亡率已經超過美國。肝轉移是結腸癌治療失敗、影響預后和長期生存的主要原因。結直腸癌具有顯著的肝臟轉移特異性，肝臟是結直腸癌最主要的轉移部位，初次確診的腸癌患者中，20％～40％存在肝轉移，根治性切除術后5年內50％患者發生異時性肝轉移，尸檢報告見35％～81％發生肝轉移。肝轉移是結腸癌治療失敗、影響預后和長期生存的主要原因。

隨著組學技術的發展，腫瘤轉移發生、異質性成瘤等相關的基因、蛋白的信號轉導途徑和其內在分子群譜改變機制不斷得到越來越詳細的闡述，蛋白質組學研究已廣泛應用于腫瘤生物學標記物的篩選和鑒定、腫瘤分類、治療及腫瘤發生機制等方面。然而，目前臨床尚缺少客觀的分子標志物預測結直腸癌異時性肝轉移的發生以及指導后續的治療。

蛋白質標記物可以在常規術后的組織標本(例如石蠟切片標本)上輕易地測量，由此減少了對新鮮或冷凍組織活檢的依賴。盡管有證據證明CRC組織蛋白質組相較正常結直腸組織發生明顯變化，但到目前為止，并沒有特異性預測CRC異時性肝轉移以及術后復發的組學生物標志物被驗證用于臨床使用。在這種情況下，蛋白質組學作為一種理想的，高度可解析的研究工具，可用于尋找新的癌癥生物標志物。

發明內容

本發明的目的是提供一種結腸癌轉移預測方法及系統，用以提供針對結直腸癌患者肝臟異時性轉移事件的預測。

為了達到上述目的，本發明一方面提供一種結腸癌轉移預測方法，包括：

S1蛋白質提取，獲取患者術中腫瘤組織的石蠟切片標本，進行脫蠟和再水化處理提取蛋白質樣品；

S2酶解脫鹽，將蛋白質樣品進行胰酶消化和脫鹽處理；

S3質譜分析，將經過步驟S2處理后的蛋白質樣品進行質譜分析獲得多肽質譜數據；

S4蛋白質信息定量分析與模型驗證，將所述多肽質譜數據進行定量分析，挑選出蛋白標志物，將蛋白質標志物作為數據集構建結腸癌轉移預測模型，基于所述模型的輸出結果判斷是否出現術后轉移。

進一步的，在所述步驟S1中，還包括：

S101，剔除腫瘤周圍間質組織；

S102，分別采用濃度為100％、67％和33％的二甲苯處理組織切片，并用濃度為100％、75％和50％的乙醇進行再水化處理；

S103，在99℃下溫育30分鐘加熱變性，靜置冷卻至室溫；

進一步的，在所述步驟S2中，還包括：

S201，將步驟S103中獲取的蛋白質樣品中加入typsin胰酶5ul(1ug/ul)，37℃恒溫箱酶解過夜；

S202，將消化的肽脫鹽、濃縮，然后重懸于含有0.1％FA的25％ACN中，然后通過使用高pH液相色譜分離消化的蛋白質樣品。

進一步的，在步驟S3中，還包括：

S301，將經過步驟S205消化處理的蛋白質樣品裝載到質譜儀的捕獲柱上進行洗脫肽處理；

S302，在高分辨率模式下以350至1500m/z測量掃描，然后以100至1250m/z在高靈敏度模式下進行質譜掃描；