[發(fā)明專利]基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的瘧原蟲快速檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010906167.X
• 申請(qǐng)日: 2020-09-01
• 公開（公告）號(hào): CN112063736A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周水茂;賈西帥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢市疾病預(yù)防控制中心
• 主分類號(hào): C12Q1/6893
• 分類號(hào): C12Q1/6893;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 武漢開元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

本發(fā)明涉及瘧原蟲檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的瘧原蟲快速檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法?；诃h(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的瘧原蟲快速檢測(cè)試劑盒，包括惡性瘧檢測(cè)引物組試劑、間日瘧檢測(cè)引物組試劑、三日瘧檢測(cè)引物組試劑、卵形瘧檢測(cè)引物組試劑、LAMP擴(kuò)增反應(yīng)液、DNA聚合酶、顯色劑；所述LAMP擴(kuò)增反應(yīng)液包括緩沖液和dNTPs；所述緩沖液中含有鎂離子且不含有金屬螯合劑；所述顯色劑包括鈣黃綠素和MnCl₂。本發(fā)明能夠快速、準(zhǔn)確、鑒別惡性瘧、間日瘧、三日瘧、卵形瘧的四種瘧原蟲蟲種。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及瘧原蟲檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的瘧原蟲快速檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

瘧疾是危害人類健康和威脅生命安全的蟲媒傳染病，被列為全球三大公共衛(wèi)生問題之一，危害人體的瘧原蟲主要有惡性瘧(P.f)、間日瘧(P.v)、三日瘧(P.m)、卵形瘧(P.o)4種，目前國內(nèi)瘧原蟲的檢測(cè)方法主要有顯微鏡鏡檢和熒光PCR。

顯微鏡鏡檢為常規(guī)方法，鏡檢雖直觀但有明顯缺陷，對(duì)低瘧原蟲血癥和混合感染敏感性不高，對(duì)檢測(cè)人員的鏡檢經(jīng)驗(yàn)要求較高，瘧原蟲鏡檢人員不固定，接觸瘧疾病例較少，鏡檢人員技術(shù)日漸生疏，瘧疾鏡檢能力有退化趨勢(shì)，WHO對(duì)中國瘧原蟲鏡檢能力外部評(píng)估，陰性血片、惡性瘧原蟲血片和間日瘧原蟲血片得分依次為92.5％、78.3％、70.8％，鏡檢漏診和誤診較高。

PCR能準(zhǔn)確鑒定瘧原蟲蟲種，但存在費(fèi)用高，且只能在設(shè)置齊全的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，限制了其在基層醫(yī)院以及醫(yī)療條件相對(duì)較差的地區(qū)應(yīng)用。

另外，國外瘧原蟲的檢測(cè)方法還包括惡性瘧(P.f)和其它瘧原蟲混合LAMP方法檢測(cè)試劑盒，其不能區(qū)分間日瘧(P.v)、三日瘧(P.m)、卵形瘧(P.o)3種瘧原蟲蟲種。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決以上問題，本發(fā)明的目的是提供一種基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的瘧原蟲快速檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，能夠快速、準(zhǔn)確、鑒別惡性瘧、間日瘧、三日瘧、卵形瘧的四種瘧原蟲蟲種。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所設(shè)計(jì)的基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的瘧原蟲快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括惡性瘧檢測(cè)引物組試劑、間日瘧檢測(cè)引物組試劑、三日瘧檢測(cè)引物組試劑、卵形瘧檢測(cè)引物組試劑、LAMP擴(kuò)增反應(yīng)液、DNA聚合酶、顯色劑；

惡性瘧檢測(cè)引物組包括：Pf-FIP：SEQ ID NO1、Pf-BIP:SEQ ID NO2、Pf-F3:SEQ IDNO3、Pf-B3:SEQ ID NO4；

間日瘧檢測(cè)引物組包括：Pv-FIP：SEQ ID NO7、Pv-BIP:SEQ ID NO8、Pv-F3:SEQ IDNO9、Pv-B3:SEQ ID NO10；

三日瘧檢測(cè)引物組包括：Pm-FIP：SEQ ID NO13、Pm-BIP:SEQ ID NO14、Pm-F3:SEQID NO15、Pm-B3:SEQ ID NO16；

卵形瘧檢測(cè)引物組包括：Po-FIP：SEQ ID NO19、Po-BIP:SEQ ID NO20、Po-F3:SEQID NO21、Po-B3:SEQ ID NO22；

所述LAMP擴(kuò)增反應(yīng)液包括緩沖液和dNTPs；所述緩沖液中含有鎂離子且不含有金屬螯合劑；

所述顯色劑包括鈣黃綠素和MnCl₂。

作為優(yōu)選方案，所述惡性瘧檢測(cè)引物組試劑還包括：Pf-LF：SEQ ID NO5、Pf-LB：SEQ ID NO6；所述間日瘧檢測(cè)引物組還包括Pv-LF：SEQ ID NO11、Pv-LB：SEQ ID NO12；所述三日瘧檢測(cè)引物組還包括Pm-LF：SEQ ID NO17、Pm-LB：SEQ ID NO18；所述卵形瘧檢測(cè)引物組還包括：Po-LF：SEQ ID NO23、Po-LB:SEQ ID NO24。