[發明專利]一種高效擴增人表皮成纖維細胞的培養基

在審

• 申請號: 202010903167.4
• 申請日: 2020-09-01
• 公開（公告）號: CN111961645A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 王詳;路堯
• 申請（專利權）人: 杭州優渡生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 李品

本發明提供一種高效擴增人表皮成纖維細胞的培養基，所述細胞培養基中含有miRNA，本發明提供了一種高效擴增人表皮成纖維細胞的培養基，所述培養基包含新型載體，所述新型載體包栽miRNA，可以促進干細胞體外增殖，因而可以用于人表皮成纖維細胞的增殖。

技術領域

本發明涉干細胞培養領域，特別地涉及一種高效擴增人表皮成纖維細胞的培養基。

背景技術

人皮膚成纖維細胞是組成皮膚真皮的主要結構成分，其可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網狀纖維、透明質酸等細胞外基質，對于保持皮膚強度和彈性、修復損傷及美容美體具有重要作用。是維持皮膚年輕態的決定性因素，也是維持皮膚結構穩定的重要組成部分。而由此形成的皮膚膠原蛋白修復體系一旦形成，它的生命旺盛周期為10-15年。人隨著年齡的增長，成纖維細胞數量越來越少，活性越來越低，相應的其產生的膠原蛋白、彈性纖維、透明質酸這些物質就會減少，不足以支撐皮膚結構，導致真皮層變薄，皮膚開始松弛，失去彈性，出現皺紋。

成纖維細胞攝取所需的氨基酸，如脯氨酸和賴氨酸等，在粗面內質網的核蛋白體上合成前α多肽鏈，多肽鏈輸送到高爾基復合體后，組成前膠原分子。前膠原分子由分泌囊泡帶到細胞表面，然后通過胞吐作用釋放到細胞外。在前膠原肽酶催化下，將每一前α多肽鏈的尾段除去，成為原膠原分子。許多原膠原分子成行平行排列，結合成具有周期性橫紋的膠原原纖維。由膠原原纖維互相結合形成膠原纖維。

成纖維細胞在一般創傷修復中的表現各種創傷均會造成不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損，必須通過細胞增生和細胞間基質的形成來進行組織修復。在此修復過程中，成纖維細胞起著十分重要的作用。以傷口愈合過程為例，成纖維細胞通過有絲分裂大量增殖，并從4～5天或6天開始合成和分泌大量的膠原纖維和基質成分，與新生毛細血管等共同形成肉芽組織，填補傷口組織缺損，為表皮細胞的覆蓋創造條件。在傷口愈合中，成纖維細胞主要來源于真皮乳頭層的局部成纖維細胞和未分化的間充質細胞，以及血管周圍的成纖維細胞和周細胞。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供一種高效擴增人表皮成纖維細胞的培養基。

本發明是以如下技術方案實現的：

一種高效擴增人表皮成纖維細胞的培養基，所述細胞培養基中含有miRNA。

進一步地，所述細胞培養基中還含有細胞生長因子。

進一步地，所述細胞培養基中還含有特制載體。

進一步地，所述miRNA選自hsa-miR-214、miR-UL112-3p、hsa-miR-168a、hsa-miR-156a、miR-1260b。

優選地，所述細胞生長因子為轉化生長因子FGF9。

進一步地，所述特制載體的制備方法包括：用多聚甲醛和二硫化物還原劑二硫蘇糖醇封閉巰基以促進細胞產生細胞外囊泡。

優選地，所述miRNA包含于特制載體中。

進一步地，所述細胞培養基含有轉鐵蛋白、轉化生長因子FGF9、地塞米松、煙酸肌醇酯、裝載有miRNA的載體、DMEM培養基和胎牛血清。

進一步地，所述細胞培養基含終濃度為3.5mg/L轉鐵蛋白、5μg/L轉化生長因子FGF9、0.15μmol/L地塞米松、2.0mg/L煙酸肌醇酯、0.48mg/L裝載有hsa-miR-214的載體、DMEM培養基和體積分數為8.5％的胎牛血清。

優選地，所述細胞培養基含終濃度為3.5mg/L轉鐵蛋白、5μg/L轉化生長因子FGF9、0.15μmol/L地塞米松、2.0mg/L煙酸肌醇酯、0.48mg/L裝載有has-miR-UL112-3p的載體、DMEM培養基和體積分數為8.5％的胎牛血清。