[發明專利]一種用于檢測大腸埃希菌CTX-M基因的熒光定量PCR試劑盒

在審

• 申請號: 202010902830.9
• 申請日: 2020-09-01
• 公開（公告）號: CN111876508A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 姜芹;張妤;孫冰清;黃士新;張文剛;曹瑩;顧欣;商軍;嚴鳳;張浩然;田愷;吳劍平;黃家鶯;張亦菲;王博;徐汀
• 申請（專利權）人: 上海市動物疫病預防控制中心（上海市獸藥飼料檢測所;上海市畜牧技術推廣中心）
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12R1/19
• 代理公司: 上海驍象知識產權代理有限公司 31315
• 代理人: 林煒

一種用于檢測大腸埃希菌CTX?M基因的熒光定量PCR試劑盒，包括含有用于檢測CTX?M?1群基因的上游引物、下游引物和探針，還含有用于檢測CTX?M?9群基因的上游引物、下游引物和探針，用于檢測CTX?M?1群基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，探針的序列如SEQ ID NO.3所示；用于檢測CTX?M?9群基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.4所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.5所示，探針的序列如SEQ ID NO.6所示。本發明使用的引物、探針具有良好特異性和靈敏度，對遏制細菌耐藥具有積極意義。

技術領域：

本發明屬于生物工程領域，涉及一種檢測試劑盒，具體來說是一種用于檢測產超廣譜β－內酰胺酶(ESBLs)大腸埃希菌中CTX-M-1群和CTX-M-9群基因的熒光定量PCR試劑盒。

背景技術：

β－內酰胺類藥物是化學結構中具有β－內酰胺環的一大類藥物，是目前生產量和使用量最大的抗生素類型之一，包括臨床最常使用的青霉素類與頭孢菌素類等。近年來，單環β－內酰胺類以及碳青霉烯類也使用的越來越多。隨著該類藥物的廣泛使用，細菌對該類藥物的耐藥性也日漸嚴重。國內外對其耐藥情況研究也較為廣泛，許多國家都發現了不同型的流行菌株。大腸埃希菌是寄居在人和動物腸道中的正常菌群，是臨床最常見的一種革蘭氏陰性菌，其對β－內酰胺類藥物耐藥的主要機制之一是產生超廣譜β－內酰胺酶(ESBLs)水解失活該類藥物。

ESBLs主要包括CTX-M型、TEM型、SHV型和OXA型等多種家族的酶，其中CTX-M是目前全球范圍內主要流行的ESBLs型。目前，已發現150多種CTX-M型β－內酰胺酶，根據其基因序列類型，同源性大于95％為同一群CTX-M酶，大致可分為CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-8群、CTX-M-9群、CTX-M-25群和KLUC群6個。其中又以CTX-1群和CTX-9群為全球主要流行群。

目前還沒有針對大腸埃希菌中主要流行的CTX-M型的超廣譜β-內酰胺酶檢測的試劑盒，因此，本發明有助于快速檢測產CTX-M型酶的大腸埃希菌，對了解大腸埃希菌對β-內酰胺類藥物的耐藥情況及耐藥基因分布和指導β-內酰胺類藥物臨床使用及評估耐藥風險具有重要意義。

發明內容：

針對現有技術中的上述技術問題，本發明提供了一種用于檢測產ESBLs大腸埃希菌中CTX-M-1群和CTX-M-9群基因的熒光定量PCR試劑盒，所述的這種用于檢測產ESBLs大腸埃希菌中CTX-M-1群和CTX-M-9群基因的熒光定量PCR試劑盒要解決現有技術中沒有合適的試劑盒用于檢測常見產CTX-M型超ESBLs大腸埃希菌的現狀。

本發明提供了一種用于檢測大腸埃希菌CTX-M基因的熒光定量PCR試劑盒，包括含有用于檢測CTX-M-1群基因的上游引物、用于檢測CTX-M-1群基因的下游引物、用于檢測CTX-M-1群基因的探針，用于檢測CTX-M-9群基因的上游引物、用于檢測CTX-M-9群基因的下游引物、用于檢測CTX-M-9群基因的探針，所述的用于檢測CTX-M-1群基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述的用于檢測CTX-M-1群基因的下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述的用于檢測CTX-M-1群基因的探針的序列如SEQ ID NO.3所示，所述的用于檢測CTX-M-9群基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.4所示，所述的用于檢測CTX-M-9群基因的下游引物的序列如SEQ ID NO.5所示，所述的用于檢測CTX-M-9群基因的探針的序列如SEQID NO.6所示。

進一步的，還含有陰性對照、陽性對照。

進一步的，還含有聚合酶鏈式反應試劑、Taq DNA聚合酶。

本發明中，大腸埃希菌CTX-M-1的序列為：