[發明專利]一株西羅莫司單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用

在審

• 申請號: 202010902112.1
• 申請日: 2020-09-01
• 公開（公告）號: CN112011516A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 胥傳來;姜曉倩;匡華;徐麗廣;孫茂忠;劉麗強;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明;郝昌龍;吳愛紅
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;C07K14/795;C07K14/77;C07K1/107;G01N33/577;G01N33/53
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

1.一株西羅莫司單克隆抗體雜交瘤細胞株ROX1C5，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，分類命名為單克隆細胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏編號CGMCC No.19171。

2.西羅莫司單克隆抗體，其特征在于：它由權利要求1所述保藏編號為CGMCC No.19171的西羅莫司單克隆抗體雜交瘤細胞株ROX1C5分泌產生。

3.西羅莫司半抗原的制備方法，其特征在于：稱取19mg 西羅莫司，溶解于0.6mL混合溶液中；加入13mg 羧甲基羥胺半鹽酸鹽CMO，70℃水浴攪拌6h，室溫避光靜置過夜；隨后，溶液通過氮氣吹干，重懸于1mL三氯甲烷中，并用超純水萃取三次；收集有機相，再次氮氣吹干，終產物溶于1mL無水N,N-二甲基甲酰胺DMF中，即得西羅莫司半抗原。

4.根據權利要求3所述西羅莫司半抗原的制備方法，其特征在于：所述混合溶液具體為甲醇:水:吡啶體積比為4:1:1的混合溶液。

5.免疫原西羅莫司-KLH的制備方法，其特征在于：稱取10mg權利要求3制備所得西羅莫司半抗原，將其溶解在800μL DMF中，然后加入6.3mg 1-乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDC，5mg N-羥基琥珀酰亞胺NHS，該混合物在室溫攪拌6h；稱取5mg KLH，溶解于0.1M、pH9.4的碳酸鹽緩沖液CBS中；隨后，逐滴將含半抗原溶液加入到KLH溶液中，室溫反應8h，通過透析分離完全抗原和未偶聯的小分子半抗原得到免疫原西羅莫司-KLH。

6.包被原西羅莫司-OVA的制備方法，其特征在于：稱取10mg權利要求3制備所得西羅莫司半抗原，將其溶解在800μL DMF中，然后加入6.3mg 1-乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDC，5mg N-羥基琥珀酰亞胺NHS，該混合物在室溫攪拌6h；稱取5mg OVA，溶解于0.1M、pH9.4的碳酸鹽緩沖液CBS中；隨后，逐滴將含半抗原溶液加入到OVA溶液中，室溫反應8h，通過透析分離完全抗原和未偶聯的小分子半抗原得到包被原西羅莫司-OVA。

7.權利要求2所述西羅莫司單克隆抗體的應用，其特征在于：建立西羅莫司含量的免疫檢測方法，應用于臨床血樣中西羅莫司濃度的監測。