[發明專利]一種檢測M型磷脂酶A2受體-IgG的免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法

在審

• 申請號: 202010898615.6
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN112147339A
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 黃飚;任志奇;靜亞茹
• 申請（專利權）人: 浙江博實生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/534;G01N21/64
• 代理公司: 嘉興中創致鴻知識產權代理事務所(普通合伙) 33384
• 代理人: 趙麗麗

本發明公開了一種檢測M型磷脂酶A2受體?IgG的免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法，屬于免疫檢測分析技術和納米生物技術領域，在所述試劑盒中，包括集成在試劑條上的反應緩沖液、清洗液、增強液、包被PLA2R的磁微粒溶液、銪標記的羊抗人IgG抗體溶液，另附2瓶抗PLA2R IgG的凍干校準品。上述試劑盒可以提供一種接近均相的反應體系，檢測抗PLA2R IgG的含量，縮短檢測時間，提高了效率，為臨床使用提供便利。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術和納米生物技術領域，具體涉及一種基于M型磷脂酶A2受體(PLA2R)-IgG時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法。

背景技術

在我國成年人中腎臟病的患病率達到10.8％，其腎臟病理改變以腎小球基膜通透性增加為主，主要臨床癥狀表現為尿液中大量蛋白尿、血清中白蛋白下降、血脂升高以及高度水腫。其中膜性腎病(membranous nephropathy，MN)是引起成人腎病綜合征的一個最常見的病因之一，根據病因不同主要分為特發性膜性腎病(idiopathic membranousnephropathy，IMN)、繼發性膜性腎病(second membranous nephropathy，SMN)。IMN約占膜性腎病的三分之二；SMN約占膜性腎病的三分之一，常見的致病因素有自身免疫性疾病、病毒感染、腫瘤及藥物等；

目前膜性腎病診斷上要依靠臨床表現及腎活檢病理改變，但是其缺點也很明顯，如：具有創傷，原有腎感染在穿刺后細菌擴散所致的穿刺術后感染；另外腎穿刺的費用很高，對病人來說是個痛苦、有風險、經濟負擔重的過程。如果能有其他醫學手段，特別是血清學檢查手段能對膜性腎病進行靈敏、準確地診斷和療效評估，將是該疾病診治的一個突破。

2009年Beck等在《新英格蘭醫學雜志》撰文首次發現存在于正常足細胞表面的膜性腎病的靶抗原-M型磷脂酶A2受體(PLA2R)，對膜性腎病的發病機制研究中取得了突破性進展。2011年，Qin等試驗表明抗PLA2R抗體在IMN中具有高特異性(89％)。Hofstra等研究發現在抗PLA2R抗體表達轉陰或滴度下降的IMN患者中，蛋白尿的緩解率或部分緩解率達88％，而在抗PLA2R抗體未轉陰或滴度未下降的患者中，蛋白尿的緩解率或部分緩解率僅有33％，且對于治療前后抗PLA2R抗體濃度持續高水平表達的患者，病情不易得到緩解或緩解后較易復發。

毫無疑問，PLA2R-IgG的發現及檢測不僅對膜性腎病的診斷、活動性的判斷是一個理想的標志物，在膜性腎病的診治療時機的把握、有效藥物的選擇以及治療效果的判也提供了一個重要的指標，越來越的研究證實了PLA2R-IgG的發現及檢測對膜性腎病的診斷和治上的重要臨床應用價值。

采用時間分辨熒光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)進行PLA2R-IgG的檢測。TRFIA是一種以鑭系元素螯合物為標記物的新興技術，具有零本底、線性范圍寬、穩定性好等特點，靈敏度可達到10^-18mol/L，較ELISA、CLIA、ECLIA等的10^-9～10^-15mol/L更高，TRFIA的主要創新內容在于應用熒光強度大、衰變時間長、分子量小的鑭系原子標記免疫分子，而不是常用的大分子的酶或放射性同位素，故建立的免疫方法靈敏度和量程成倍增加，而且沒有放射性污染。時間分辨熒光免疫分析技術標記離子的熒光是類線光譜，其特點是激發光波長范圍較寬而發射光譜峰范圍較窄，這樣有利于降低本底的熒光強度，提高檢測的分辨率；在時間分辨熒光免疫分的激發光和發射光之間存在較大的Stokes位移，這有利于排除非特異熒光的干擾，從而增強了測量的特異性；標記離子螯合物產生的熒光強度高，壽命長，這有利于消除樣品及環境中非特異熒光物質對檢測結果的影響；每一次檢測都要重復進行1000次，取平均的熒光計數值作為結果，從而提高了檢測的準確性。TRFIA是國內外免疫分析的主要發展方向之一。

發明內容