[發明專利]一種檢測免疫球蛋白G4時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法

在審

• 申請號: 202010898614.1
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN112147338A
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 靜亞茹;黃飚;傅凱杰;任志奇
• 申請（專利權）人: 浙江博實生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/531
• 代理公司: 嘉興中創致鴻知識產權代理事務所(普通合伙) 33384
• 代理人: 趙麗麗

本發明公開了一種檢測免疫球蛋白G4時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法，屬于免疫檢測分析技術和納米生物技術領域，在所述試劑盒中，包括集成在試劑條上的反應緩沖液、清洗液、增強液、包被IgG4抗體的磁微粒溶液、銪標記的IgG4抗體溶液，還有2瓶IgG4的校準品。上述試劑盒可以提供一種接近均相的反應體系，檢測IgG4的含量，縮短檢測時間，提高了效率，為臨床使用提供便利。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術和納米生物技術領域，具體涉及一種基于免疫球蛋白G4(IgG4)時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法。

背景技術

免疫球蛋白G是血清中含量最高的免疫球蛋白，它是血液和細胞外液中的主要抗體成分，發揮重要的免疫學作用。在人體中IgG可按重鏈氨基酸分為4 種亞型，分別為IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。在血清中，雖然IgG4的含量在4種亞型中最低(占1％-7％)，盡管如此，IgG4與某些疾病的關聯卻越來越被重視。2001年，日本學者Hamano等發現，自身免疫性胰腺炎AIP患者血清IgG4 水平顯著升高，且在AIP的胰腺組織中有大量IgG4陽性漿細胞浸潤，該類患者使用糖皮質激素(Glucocorticoids，GCs)后癥狀得到改善，血清IgG4水平降低。2003年首次由Kamisawa等提出了IgG4系統性疾病的概念，隨著研究的深入，此后多部位的類似疾病如硬化性膽管炎、間質性肺炎、腎炎、腹膜后纖維化、炎性假瘤等陸續被發現，亦可在頭頸部如涎腺、頜下腺、腮腺及腦下垂體等部位發生，雖然病變部位不同，但是病灶部位漿細胞均高表達IgG4，表現為慢性纖維性炎癥，血清中均有IgG4升高及高滴度自身抗體等共同特征。因此在2010 年IgG4-RD作為一種新的臨床疾病實體被宣布確立，將其正式命名為IgG4相關性疾病(IgG4-RD)日益得到醫學界關注。

IgG4相關疾病在60歲左右老年男性患者最為常見，但隨著對疾病認識的逐漸深入，發現除了老年人，兒童、青壯年和女性都有可能患IgG4相關疾病。此外，IgG4相關疾病的發生，還可能與體內的激素水平變化有關。IgG4相關疾病是一種與IgG4淋巴細胞密切相關的慢性、系統性疾病，該疾病以血清IgG4水平升高以及IgG4陽性細胞浸潤多種器官和組織為特征，常見受累器官包括淚腺、胰腺和腹膜后間隙等，累及的器官或組織由于慢性炎癥及纖維化進程可導致彌漫性腫大。

時間分辨熒光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)進行IgG4的檢測。TRFIA是一種以鑭系元素螯合物為標記物的新興技術，具有零本底、線性范圍寬、穩定性好等特點，靈敏度可達到10^-18mol/L，較ELISA、CLIA、 ECLIA等的10^-9～10^-15mol/L更高，TRFIA的主要創新內容在于應用熒光強度大、衰變時間長、分子量小的鑭系原子標記免疫分子，而不是常用的大分子的酶或放射性同位素，故建立的免疫方法靈敏度和量程成倍增加，而且沒有放射性污染。時間分辨熒光免疫分析技術標記離子的熒光是類線光譜，其特點是激發光波長范圍較寬而發射光譜峰范圍較窄，這樣有利于降低本底的熒光強度，提高檢測的分辨率；在時間分辨熒光免疫分的激發光和發射光之間存在較大的 Stokes位移，這有利于排除非特異熒光的干擾，從而增強了測量的特異性；標記離子螯合物產生的熒光強度高，壽命長，這有利于消除樣品及環境中非特異熒光物質對檢測結果的影響；每一次檢測都要重復進行1000次，取平均的熒光計數值作為結果，從而提高了檢測的準確性。TRFIA是國內外免疫分析的主要發展方向之一。

發明內容

針對現有技術中存在的缺陷，本專利通過將TRFIA與磁微粒技術相結合，將所有試劑集成在一個試劑條上，建立IgG4-TRFIA方法，該檢測可由全自動設備操作，準確的高，單人份檢測，使用方便，將此技術應用于免疫功能及免疫疾病的研究，可以更準確的鑒別診斷硬化性膽管炎、間質性肺炎、腎炎、腹膜后纖維化、炎性假瘤，以通過方便的血清學檢查進行IgG4相關疾病療效評估。為IgG4相關疾病的診斷和治療提供一個非常便捷的新手段。