[發明專利]一種基于胃蛋白酶原PGⅡ的免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法

在審

• 申請號: 202010898581.0
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN112147333A
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 任志奇;黃飚;萬文成
• 申請（專利權）人: 浙江博實生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/573;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/531
• 代理公司: 嘉興中創致鴻知識產權代理事務所(普通合伙) 33384
• 代理人: 趙麗麗

本發明公開了一種基于胃蛋白酶原PGⅡ的免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法，屬于免疫檢測分析技術和納米生物技術領域，在所述試劑盒中，包括集成在試劑條上的反應緩沖液、清洗液、增強液、包被PGⅡ抗體的磁微粒溶液、銪標記的PGⅡ抗體溶液，還有2瓶PGⅡ的凍干校準品。上述試劑盒可以提供一種接近均相的反應體系，檢測PGⅡ的含量，縮短檢測時間，提高了效率，為臨床使用提供便利。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術和納米生物技術領域，具體涉及一種基于胃蛋白酶原Ⅱ時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法。

背景技術

胃蛋白酶原(pepsinogen，PG)是由胃部分泌的參與消化的胃蛋白酶的前體，通常約1％的PG可通過胃黏膜進入血液循環，可分為PGⅠ和PGⅡ兩種生化和免疫活性等特征的不同亞群，且細胞來源及組織內分布各不相同。血清PG濃度主要反映胃腺細胞的分泌水平。PGⅠ是檢測胃泌酸腺細胞功能的指征，胃酸分泌增多PGⅠ升高，反之則降低；PGⅡ與胃底黏膜病變的相關性較大，其升高與胃底腺管萎縮、胃上皮化生或假幽門腺化生、異型增值有關；PGⅠ/Ⅱ比值進行性降低與胃黏膜萎縮進展相關。聯合測定PGⅠ、PGⅡ及PGⅠ/Ⅱ比值可起到胃底腺黏膜“血清學活檢”的作用。在做胃鏡前后測定PGⅠ和PGⅡ水平，并定期追蹤，可有效監控胃黏膜狀態和功能。

時間分辨熒光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)是一種以鑭系元素螯合物為標記物的新興技術，具有零本底、線性范圍寬、穩定性好等特點，靈敏度可達到10^-18mol/L，較ELISA、CLIA、ECLIA等的10^-9～10^-15mol/L更高，TRFIA的主要創新內容在于應用熒光強度大、衰變時間長、分子量小的鑭系原子標記免疫分子，而不是常用的大分子的酶或放射性同位素，故建立的免疫方法靈敏度和量程成倍增加，而且沒有放射性污染。時間分辨熒光免疫分析技術標記離子的熒光是類線光譜，其特點是激發光波長范圍較寬而發射光譜峰范圍較窄，這樣有利于降低本底的熒光強度，提高檢測的分辨率；在時間分辨熒光免疫分的激發光和發射光之間存在較大的Stokes位移，這有利于排除非特異熒光的干擾，從而增強了測量的特異性；標記離子螯合物產生的熒光強度高，壽命長，這有利于消除樣品及環境中非特異熒光物質對檢測結果的影響；每一次檢測都要重復進行1000次，取平均的熒光計數值作為結果，從而提高了檢測的準確性。TRFIA是國內外免疫分析的主要發展方向之一。

發明內容

針對現有技術中存在的缺陷，本發明的目的是將TRFIA與磁微粒技術相結合，將所有試劑集成在一個試劑條上，建立PGⅡ-TRFIA方法，該檢測可由全自動設備操作，準確度高，單人份檢測，使用方便，將此技術應用于胃部病變的研究，可以更準確的鑒別診斷淺表性胃炎、胃粘膜糜爛潰瘍、萎縮性胃炎、慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎、十二指腸潰瘍等胃部病變，以通過方便的血清學檢查進行胃部病變的療效評估。為胃部病變的診斷和治療提供一個非常便捷的新手段。

本發明解決技術問題所采用的技術方案是：一種基于胃蛋白酶原PGⅡ的免疫分析試劑盒，所述試劑盒內包括至少一個試劑架，每個所述的試劑架上包括至少五個試劑條，所述試劑盒內還包括至少二瓶PGⅡ的凍干校準品；所述試劑條上包括磁珠孔、反應緩沖液孔、銪標凍干孔、檢測孔、清洗液孔、增強液孔和若干個預留孔；所述磁珠孔內填充包被PGⅡ抗體的磁微粒溶液，所述反應緩沖液孔內填充反應緩沖液，所述銪標凍干孔內填充銪標記的PGⅡ抗體溶液，所述檢測孔內填充待檢樣品，所述清洗液孔內填充清洗液，所述增強液孔內填充增強液。

進一步地，所述試劑盒內包括5～20個試劑架，每個所述的試劑架上設有5個試劑條；所述試劑盒內還包括2瓶PGⅡ的凍干校準品。