[發(fā)明專利]一種靶向CIRBP在抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010894734.4
• 申請(qǐng)日: 2020-08-31
• 公開（公告）號(hào): CN112048539A
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董福祿;盧婷婷;王銳;陳亦凡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/02
• 分類號(hào): C12Q1/02
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 錢超

本發(fā)明公開了一種靶向CIRBP在抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用，通過體外實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建攜帶敲降CIRBP的shRNA的慢病毒和對(duì)照空載病毒，并用病毒感染人前列腺癌細(xì)胞系（PC3和LNCaP），然后通過單克隆傳代，得到穩(wěn)定敲降CIRBP和對(duì)照病毒感染的PC3和LNCaP細(xì)胞。然后通過western blot方法檢測(cè)對(duì)照組和敲降組CIRBP的表達(dá)水平，證實(shí)敲降組確實(shí)下調(diào)了CIRBP的表達(dá)。然后檢測(cè)敲降CIRBP后對(duì)前列腺癌細(xì)胞系PC3和LNCaP的影響，我們發(fā)現(xiàn)敲降CIRBP后可以顯著抑制兩種前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種靶向CIRBP在抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

前列腺癌是目前全世界男性第二大癌癥，每年造成超過25萬人死亡。隨著社會(huì)老齡化、人口城市化、膳食結(jié)構(gòu)西方化，我國(guó)前列腺癌發(fā)病率呈顯著增長(zhǎng)趨勢(shì)，對(duì)男性的生命健康構(gòu)成威脅。臨床上，通常將前列腺癌分為局部型和進(jìn)展型。局部型前列腺癌可以通過睪丸切除術(shù)等進(jìn)行根治性治療，五年生存率較高，而進(jìn)展型前列腺癌無法根治。由于我國(guó)男性缺乏前列腺特異性抗原（PSA）的篩查，前列腺癌患者在就診時(shí)病灶多已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移發(fā)展為進(jìn)展型前列腺癌。此類前列腺癌一般只能通過雄激素去勢(shì)療法進(jìn)行治療，雖然具有一定的療效，但對(duì)于腫瘤的抑制一般只能維持1.5至4年。隨著疾病的進(jìn)展，多數(shù)病人逐漸發(fā)展為去勢(shì)抵抗型前列腺癌，使雄激素去勢(shì)療法失去治療效果。化療通常作為激素難治性前列腺癌或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的晚期前列腺癌患者的治療措施，用于延長(zhǎng)患者的生命。然而，雖然近年來化療方案不斷改進(jìn)，新的化療藥物層出不窮，但抗前列腺癌藥物依然普遍存在靶向性差和毒性大等問題，極大程度上限制了藥效的發(fā)揮和長(zhǎng)期應(yīng)用，使前列腺癌產(chǎn)生多耐藥性，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，這也是臨床治療前列腺癌最常見和最難克服的問題。當(dāng)前常用的化療藥物對(duì)前列腺癌的療效并不十分理想，急需開發(fā)新型的抗前列腺癌藥物和尋找新型抗癌靶點(diǎn)。

冷誘導(dǎo) RNA 結(jié)合蛋白 (CIRBP) 是一種擁有 172 個(gè)殘基的多功能感應(yīng)蛋白，其最初是由 32oC 溫度條件下培養(yǎng)的小鼠纖維母細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞中分離。相反，CIRBP 在溫度升高的細(xì)胞或組織中的表達(dá)有所下降。CIRBP 蛋白質(zhì)由一個(gè)氨基末端 RNA 結(jié)合域與一個(gè)羧基末端富甘氨酸域組成。包括低氧、中暑、滲透壓休克或氧化條件等在內(nèi)的應(yīng)激性刺激會(huì)導(dǎo)致 CIRBP 通過涉及依賴于 CIRBP 甲基化的出核機(jī)制，從胞核遷移至細(xì)胞質(zhì)應(yīng)激顆粒。CIRBP 在調(diào)節(jié)凋亡和將神經(jīng)干細(xì)胞的多能性維持在中度低溫條件中發(fā)揮作用。研究表明，CIRBP 通過對(duì) CLOCK 表達(dá)的翻譯后調(diào)節(jié)，有助于生理節(jié)律調(diào)節(jié)。在腫瘤研究方面，CIRBP與膀胱癌的發(fā)生和鼻咽癌的預(yù)后不良相關(guān)，對(duì)前列腺癌的遷移及侵襲的影響未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

解決的技術(shù)問題：針對(duì)上述現(xiàn)有抗前列腺癌藥物靶向性差和毒性大等技術(shù)問題，本發(fā)明目的之一為提供一種靶向CIRBP在抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)方案：

一種靶向CIRBP在抗前列腺癌藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，步驟為：

第一步，細(xì)胞系構(gòu)建：將293T細(xì)胞傳至T75的培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞貼壁后換為無抗生素培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞密度80%-90%時(shí)用脂質(zhì)體2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染備用；

第二步，配質(zhì)粒與opti-DMEM的混合物：加入載體質(zhì)粒20μg與12μg包裝質(zhì)粒PHelper1.0 和10μg包裝質(zhì)粒PHelper 2.0后加opti-DMEM將體積補(bǔ)足至1.5mL；配脂質(zhì)體與opti-DMEM的混合物：脂質(zhì)體40μL每瓶加opti-DMEM將體積補(bǔ)足至1.5mL，放置五分鐘；將脂質(zhì)體與opti-DMEM的混合物加入質(zhì)粒與opti-DMEM的混合物中，混勻，孵育20分鐘，得脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物；