[發明專利]一種干細胞凍存液及其制備和使用方法

在審

• 申請號: 202010894723.6
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN111838138A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 王忠偉;李巍;陳愛花;符春娛
• 申請（專利權）人: 海南濟民博鰲國際醫院有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 文小花

1.一種干細胞凍存液，其特征在于，包括以下組份：按質量百分比，

DMSO 0～20％、甘油1～2％、海藻糖1～2％、乙醇2～5％、N-十二烷酰基肌氨酸0.05～0.07％、磷酸鈣0.7～1.0％、豬苓酸C 0.03～0.06％、葫蘆巴堿0.02～0.05％、1,8-桉葉素0.01～0.04％、余量是DMEM培養基。

2.根據權利要求1所述的干細胞凍存液，其特征在于，包括以下組份：按質量百分比，DMSO 0～5％、甘油1～2％、海藻糖1～2％、乙醇2～3％、N-十二烷酰基肌氨酸0.05～0.07％、磷酸鈣0.7～1.0％、豬苓酸C 0.03～0.04％、葫蘆巴堿0.03～0.05％、1,8-桉葉素0.02～0.03％、余量是DMEM培養基。

3.根據權利要求1所述的干細胞凍存液，其特征在于，包括以下組份：按質量百分比，DMSO 0％、甘油2％、海藻糖1％、乙醇3％、N-十二烷酰基肌氨酸0.06％、磷酸鈣0.8％、豬苓酸C 0.04％、葫蘆巴堿0.05％、1,8-桉葉素0.02％、余量是DMEM培養基。

4.根據權利要求1所述的干細胞凍存液，其特征在于，所述干細胞包括胚胎干細胞、成體干細胞。

5.根據權利要求1所述的干細胞凍存液，其特征在于，所述干細胞為脂肪間充質干細胞。

6.權利要求1所述的干細胞凍存液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將豬苓酸C與磷酸鈣混合均勻，得混合物A；將N-十二烷酰基肌氨酸、1,8-桉葉素、葫蘆巴堿與乙醇混合，20～25℃且100～150rpm攪拌條件下加入混合物A和/或DMSO，混合5～10min；依次加入甘油、海藻糖和DMEM培養基，混勻即得干細胞凍存液。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，將豬苓酸C與磷酸鈣混合，在30～35℃條件下均勻，保溫備用。

8.權利要求1所述的干細胞凍存液的使用方法，其特征在于，將細胞懸液與干細胞凍存液混勻，裝入凍存管中，凍存管先在0～2℃放置30～35min，然后-30～-35℃放置60～70min，-60～-65℃放置9～10h，之后采用-196℃液氮進行凍存。

9.根據權利要求8所述的使用方法，其特征在于，細胞懸液與干細胞凍存液混勻后，細胞密度為4×10⁶/ml。