[發明專利]一種吸附菠蘿蛋白酶的吸附樹脂材料及其制備方法

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• 申請號: 202010894555.0
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN112011530A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 李錦云
• 申請（專利權）人: 羚鯊貿易（東莞）有限公司
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08;C12N11/04;C12N9/64;B01J20/24;B01J20/28;B01J20/30
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 黃曉蘭

本發明提供一種吸附菠蘿蛋白酶的吸附樹脂材料及其制備方法，其中菠蘿蛋白酶包括游離酶和固定酶，制備工藝為：將吸附樹脂微球充分溶脹后，加入雙子型表面活性劑反膠束溶液，升溫反應，洗滌至中性，干燥，得到反膠束接枝的樹脂載體；將反膠束接枝的樹脂載體加入酸性溶劑中振蕩處理后，用純水洗滌，加入含菠蘿蛋白酶的磷酸緩沖液，恒溫振蕩進行物理吸附，離心分離，得到固體吸附酶的樹脂；將固體吸附酶的樹脂冷凍干燥后，加入菠蘿蛋白酶游離酶溶液和交聯劑，攪拌，成型固化，得到吸附菠蘿蛋白酶的吸附樹脂材料。本發明制備的復合材料中利用吸附樹脂和反膠束的固定菠蘿蛋白酶，并在表面附著菠蘿蛋白酶游離酶，使制備復合材料具有短期和長期的酶活力。

技術領域

本發明屬于固定酶樹脂材料技術領域，具體涉及一種吸附菠蘿蛋白酶的吸附樹脂材料及其制備方法。

背景技術

菠蘿蛋白酶是一種天然植物蛋白酶，屬于巰基蛋白酶，可從菠蘿的葉、皮和果肉等中提取出來。菠蘿蛋白酶由許多種的酶所組成，主要分為蛋白水解酶和非蛋白水解酶兩類，生物活性特別高，可使多肽類水解成為低分子量的肽類，具備水解酰胺基鍵和酯類的作用，在食品、生物醫藥、化妝品和紡織領域都有廣泛的用途。

菠蘿蛋白酶的大小、活性和穩定性直接影響菠蘿蛋白酶的使用效果，目前為了提高菠蘿蛋白酶的穩定性和活性，通常需要將菠蘿蛋白酶進行固定化處理。固定酶技術是保存酶的主要手段，是通過物理吸附將菠蘿蛋白酶吸附到固定酶載體中，最大限度地吸附酶并維持酶分子空間構象，在固定化菠蘿蛋白酶的過程中，酶的活性、溫度穩定性、酸堿穩定性等都會對固定菠蘿蛋白酶之后的使用造成影響。

中國專利CN1321191C公開的一種用固定化酶生產殼寡糖的方法，將分子篩/氧化鋁/玻璃珠/吸附樹脂/離子交換樹脂固定化介質與氨丙基三乙氧基硅烷/環氧氯丙烷/戊二醛偶聯劑,在20-110℃下于有機相或水相中進行反應，得到活化的固定化介質，然后將菠蘿蛋白酶與活化的固定化介質于0-0.2M磷酸鹽或醋酸鹽緩沖溶液中進行反應，使酶固定在介質的表面，得到固定化酶。最后將固定化酶加入到殼聚糖溶液中進行酶降解反應，即制得殼寡糖，反應結束后，過濾回收固定化酶。由上述現有技術可知，通過將偶聯劑對固定化介質進行活化處理后，再吸附菠蘿蛋白酶，可提高菠蘿蛋白酶與固定載體的結合力，提高菠蘿蛋白酶在使用過程中的可操作性。中國文獻(“醋酸纖維素微球的制備及吸附菠蘿蛋白酶的研究”，侯向華)公開了吸附菠蘿蛋白酶的醋酸纖維素微球的制備方法，將醋酸纖維素充分溶解于1-烯丙基-3-甲基咪唑氯鹽離子液體中，加入石蠟和Span80乳化反應，然后緩慢降溫使醋酸纖維素溶液凝結成球，再地加入蒸餾水中，形成醋酸纖維素微球，然后以醋酸纖維素微球為吸附劑，吸附菠蘿蛋白酶溶液，恒溫振蕩充分吸附，得到吸附菠蘿蛋白酶的醋酸纖維素微球。由上述現有技術可知，有機材料和無機材料都可以作為菠蘿蛋白酶的吸附材料，但是目前針對菠蘿蛋白酶最佳吸附載體方面的研究并不多見。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種吸附菠蘿蛋白酶的吸附樹脂材料及其制備方法，本發明制備的吸附樹脂材料中利用吸附樹脂和反膠束的固定菠蘿蛋白酶，并在表面附著菠蘿蛋白酶游離酶，使制備復合材料具有短期和長期的酶活力。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

一種吸附菠蘿蛋白酶的吸附樹脂材料，所述吸附菠蘿蛋白酶的吸附樹脂材料包括吸附樹脂微球、反膠束、菠蘿蛋白酶和交聯劑，所述交聯劑包括甲醛、乙二醛、戊二醛或者雙醛淀粉中的一種或者幾種。

作為上述技術方案的優選，所述菠蘿蛋白酶包括游離酶和固定酶。

本發明還提供所述的一種吸附菠蘿蛋白酶的吸附樹脂材料的制備方法，包括以下步驟：

(1)將吸附樹脂微球加入溶劑中，充分溶脹后，加入雙子型表面活性劑反膠束溶液，升溫反應，洗滌至中性，干燥，得到反膠束接枝的樹脂載體；