[發明專利]一種鑒別蘿卜葉形的InDel引物及其應用

有效

• 申請號: 202010894554.6
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN111850160B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 張麗;王慶彪;王艷萍
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明屬于蘿卜育種技術領域，特別是涉及一種鑒別蘿卜葉形的InDel引物及其應用。本發明提供一種鑒別蘿卜葉形的InDel引物，所述InDel引物包括InDel593引物和InDel594引物；所述InDel593引物的上游引物如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述InDel593引物的下游引物如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；所述InDel594引物的上游引物如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，所述InDel594引物的下游引物如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。本發明提供的引物與控制蘿卜葉型的基因有連鎖關系，能夠準確鑒定蘿卜葉的葉型。

技術領域

本發明屬于蘿卜育種技術領域，特別是涉及一種鑒別蘿卜葉形的InDel引物及其應用。

背景技術

葉形作為農作物重要的農藝性狀，影響株型、群體的通風透光性和光能利用率，也與農作物適應逆境有關。例如雞爪葉棉花和復葉番茄能夠顯著提高群體的光合效率；葉緣裂刻深的葉片能更有效的通過對流散熱來抵御高溫傷害，并能調控水分脅迫；此外葉片形態還可以通過調節庫源關系、地上與地下生長平衡來增加作物的產量和生物量。

蘿卜(RaphanussativusL.)是原產于我國的一種重要蔬菜，年栽培面積1800萬畝，占我國蔬菜面積的6％。蘿卜用途廣泛，生態類型豐富，同時由于其具有重要的保健與藥用價值，已經成為世界上重要的蔬菜作物。葉形也是蘿卜重要的農藝性狀之一，不同的葉形對產量、肉質根的生長速度、開花期及光能利用率等都有影響。同時葉形還是維持蘿卜地下與地上生長平衡的關鍵因素之一。蘿卜的葉形、葉緣和葉裂刻變異豐富，且存在高緯度和低緯度類型差異。按葉緣分裂程度不同，蘿卜的葉形可分為無裂刻(板葉)、淺裂和深裂(近板葉)及全裂刻(花葉)。蘿卜葉形主要由遺傳因素決定，但調控機制較為復雜，在不同材料中花葉相對于板葉表現為顯性、不完全顯性或隱性。例如花葉心里美蘿卜在營養生長期葉緣表現全裂，但在生殖生長期葉緣表現無裂刻。開發控制蘿卜葉形的分子標記有助于對蘿卜葉形進行精準鑒別。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種鑒別蘿卜葉形的InDel引物及其應用。本發明提供的鑒別方法能夠精準的鑒定蘿卜葉形。

為了實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：

本發明提供了一種鑒別蘿卜葉形的InDel引物，所述InDel引物包括InDel593引物和/或InDel594引物；所述InDel593引物的上游引物具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述InDel593引物的下游引物具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；所述InDel594引物的上游引物具有如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，所述InDel594引物的下游引物具有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

本發明還提供了上述引物在鑒別蘿卜葉型中的應用。

優選的，所述鑒別的方法包括以下步驟：

(1)提取待檢測蘿卜材料的基因組DNA；

(2)以蘿卜材料的DNA為模板，利用InDel593引物和InDel594引物分別對蘿卜材料的DNA進行PCR擴增，得到PCR產物；

(3)對PCR產物進行電泳，當僅利用InDel593引物進行PCR時，擴增得到的PCR產物片段大小為179bp，則表明檢測的蘿卜材料為花葉品種；擴增得到的PCR產物片段大小為163bp，則表明檢測的蘿卜材料為板葉品種；擴增得到的PCR產物片段大小同時包含179bp和163bp，則表明檢測的蘿卜材料為花葉品種；

當僅利用InDel594引物進行PCR擴增時，得到的PCR產物片段大小為185bp，則表明檢測的蘿卜材料為花葉品種；擴增得到的PCR產物片段大小為179bp，則表明檢測的蘿卜材料為板葉品種；擴增得到的PCR產物片段大小同時包含185bp和179bp，則表明檢測的蘿卜材料為花葉品種；