[發(fā)明專利]一種檢測DNA損傷標志物的稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010892563.1 | 申請日： | 2020-08-31 |
| 公開（公告）號： | CN112159661B | 公開（公告）日： | 2022-09-27 |
| 發(fā)明（設計）人： | 于慧;郭會琴;顏流水;劉小明;李可心;田凌溪 | 申請（專利權(quán)）人： | 南昌航空大學 |
| 主分類號： | C09K11/85 | 分類號： | C09K11/85;C09K11/02;G01N21/64 |
| 代理公司： | 南昌洪達專利事務所 36111 | 代理人： | 劉凌峰 |
| 地址： | 330000 江*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 dna 損傷 標志 稀土 轉(zhuǎn)換 熒光 探針 制備 方法 及其 應用 | ||
本發(fā)明公開了一種檢測DNA損傷標志物的稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法及其應用，具體步驟如下：將酸性品紅與溶于酸性緩沖溶液的8?OHdG進行預混合并孵化一段時間，然后加入經(jīng)過表面氨基化修飾的上轉(zhuǎn)換納米材料NaYF4:Er,Yb(NH2?UCNPs)，充分混合后在980nm激發(fā)光照射下進行檢測，發(fā)現(xiàn)體系在545nm處的熒光強度與樣品空白熒光強度的差值(F?F0)和8?OHdG加入濃度的負對數(shù)呈正比關系，以此實現(xiàn)對8?OHdG的定量檢測，所構(gòu)建探針抗背景干擾能力強且毒性低，所構(gòu)建檢測方法靈敏度高、線性范圍寬、選擇性較強，體系穩(wěn)定且操作簡便，無需使用核酸適配體修飾材料，成本較低。
技術(shù)領域
本發(fā)明設計屬于熒光納米探針檢測領域，具體涉及一種檢測DNA 損傷標志物的稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法及其應用。
背景技術(shù)
活性氧(ROS)作為生理過程、代謝和其他生化反應的一部分，在需氧生物的活細胞中不斷形成，由于它們的反應性和一系列外源性因素，會對細胞膜脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA造成氧化損傷，導致老化、惡性腫瘤和其他退行性疾病。因此開發(fā)一種快速靈敏檢測DNA損傷的方法對于評估各類環(huán)境污染問題對人體健康狀況的影響以及疾病的早期預測具有重要意義。生物標志物8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)最早由Kasai和Nishimura于 1984年報道，可通過血液運輸并排泄到尿液中而不進行代謝，被最終確立為常用的DNA損傷標志物。通過對尿樣中8-OHdG的濃度檢測可用于評價人體DNA損傷程度。
目前已報道的8-OHdG檢測方法主要包括高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC/MS)、電泳法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、電化學法等，然而，這些技術(shù)由于預處理繁雜、分析時間長、重復性差等原因顯示出一定的局限性，我們需要一種簡單、快捷的方法用于檢測8-OHdG。近年來，熒光檢測因其高靈敏度、高穩(wěn)定性、很小的細胞毒性等優(yōu)點被廣泛的研究和使用。
稀土摻雜上轉(zhuǎn)換納米材料(UCNPs)作為新型的發(fā)光材料，在近紅外光激發(fā)下可發(fā)出可見光，這種反斯托克斯發(fā)光特性使UCNPs具有較深的穿透深度、較高的化學穩(wěn)定性及較低的毒性等優(yōu)良性質(zhì)，而NaYF4:Er,Yb 被認為是上轉(zhuǎn)換效率最高的材料之一。此外，在近紅外光激發(fā)下，生物組織本身所產(chǎn)生的熒光以及散射光幾乎是可以忽略的。近年來，基于上轉(zhuǎn)換材料構(gòu)建熒光共振能量轉(zhuǎn)移體系廣泛被應用于各類物質(zhì)的檢測和分析。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種檢測DNA損傷標志物的稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針及其應用，與現(xiàn)有方法相比背景干擾低，靈敏度高，毒性低、體系穩(wěn)定且操作簡便，具有較大的應用潛力。
本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種檢測DNA損傷標志物的稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針及其應用，包括熒光探針的構(gòu)建，步驟如下：
制備上轉(zhuǎn)換納米材料NaYF4:Er,Yb并對其進行硅烷化處理，得到表面氨基化的上轉(zhuǎn)換納米材料NH2-UCNPs，分散在超純水中備用；
將酸性品紅溶液與步驟(1)得到的NH2-UCNPs分散液按照一定濃度比例混合得到稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針；
步驟(2)的酸性品紅溶液與NH2-UCNPs的濃度比為 1mg/L～100mg/L:1mg/mL。
優(yōu)選的，步驟(1)中的納米上轉(zhuǎn)換材料NaYF4:Er,Yb尺寸為20-500 nm。
本發(fā)明還提供了一種檢測DNA損傷標志物的稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針的應用，將權(quán)利要求1～2任意一項所述的檢測DNA損傷標志物的稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法，制備得出的檢測DNA損傷標志物的稀土上轉(zhuǎn)換熒光探針，在檢測DNA損傷標志物中的應用。
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