[發明專利]一種分子標記物組合用于表征肺腺癌氣陰兩虛證的用途及篩選及模型建立的方法

有效

• 申請號: 202010890468.8
• 申請日: 2020-08-29
• 公開（公告）號: CN111979325B
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 柴可群;陳嘉斌;陳偉;張永軍;馬德華;沈建飛;凌志強;王寶明;王勝;胡琴琴;鄭小小
• 申請（專利權）人: 浙江省立同德醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6809;G16B15/00;G16B5/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 李亦慈;唐銀益

本發明公開了一種分子標記物組合用于表征肺腺癌氣陰兩虛證的用途及篩選及模型建立的方法，分子標記物組合為QSOX1、FLJ20021、IFITM5、SP1、HRASLS2、EREG、KPNA4、SLC7A11、RIPK4、OCLM，包括獲取樣本的單核白細胞PBMCs：清晨收集空腹靜脈血2?4ml，PBS與人外周血等體積混勻，加入等體積淋巴細胞分離液液面上，室溫，離心，取中間白膜層，加入PBS洗去淋巴細胞分離液，重復兩次后，計數并加入RPMI?1640完全培養基重懸備用等步驟，本發明為肺腺癌氣陰兩虛證的辨證論治提供臨床輔助工具，提升中醫藥治療的科學內涵，促進中醫、中西醫結合防治肺癌水平的提升。

技術領域

本發明屬于臨床醫學、分子醫學、檢驗醫學、中醫學或中西醫結合醫學領域，具體的說，是一種分子標記物組合用于表征肺腺癌氣陰兩虛證的用途及篩選及模型建立的方法。

背景技術

氣陰兩虛證是非小細胞肺癌的中醫典型證候這一觀點為業內的共識。其判斷方式為中醫臨床醫師經四診合參后得出主觀判斷結論，這一模式延續至今，其主要內容即參考《中藥新藥臨床研究指導原則(2002)》、《惡性腫瘤中醫診療指南》中的相關內容，但缺乏客觀量化的標準，且結果的準確性因中醫醫生臨床水平的高低而表現出顯著差異性，開展臨床研究及推廣均受到限制。中醫證型的客觀量化是目前制約中醫學進一步發展的科學難題，也是中醫學難以納入現代科學評價體系并與其他學科進行直接交流的重要原因。但是，中醫、中西醫結合對于肺癌的臨床療效肯定，尤其是氣陰兩虛證人群，諸多臨床研究表明其可以作為判斷預后的獨立因素，且可能是靶向治療獲益的優勢人群。因此，進一步研究非小細胞肺癌氣陰兩虛證的生物學內涵可為解決上述科學難題提供研究依據。針對非小細胞肺癌的科學研究表明，在蛋白、基因等各個分子層面均可找到能反映惡性腫瘤生物學特征的分子標記物，如驅動基因EGFR等及其相關的蛋白及miRNA等。基礎研究表明，氣陰兩虛證的生物學內涵比較復雜，可能涉及免疫、炎癥、腫瘤血管生成等多個內容。因此，將上述兩者相結合并運用科學方法從中篩選出具有客觀表征中醫證型作用的分子標記物是科學可行的。目前，已有運用多組學技術探索中醫證型生物學內涵的研究并發現了諸多分子標記物，但可表征非小細胞肺癌氣陰兩虛證的分子標記物的研究未見報道；人體的代謝產物、蛋白表達等因易受到疾病階段、生活環境等較多因素的影響，其在表征中醫證型上的特異性和準確性不足；而作為其上游的基因，其功能結構及表達具有較好的穩定性，可通過轉錄組第二代測序技術(RNA-Sequenc,RNA-Seq)進行檢驗，進而通過生信分析后有助于揭示特定疾病階段的內在分子機制及發生發展的過程，也是目前探究中醫證型生物學基礎的重要技術手段。在此基礎上，運用統計學方法及數學建模等方式，有助于將篩選得到分子標記物轉化為客觀量化非小細胞肺癌氣陰兩虛證的核心參數，有助于開展臨床研究及推廣。

發明內容

本發明針對目前肺腺癌氣陰兩虛證缺乏客觀分子標記物的現狀，作出了改進，提供了一種基因組合用于表征肺腺癌氣陰兩虛證的用途及篩選及模型建立的方法，通過前期研究已證實，肺腺癌氣陰兩虛證是EGFR-TKIs的優勢人群，其OS達到了21.9個月。進一步運用RNA-Seq技術表征了肺腺癌氣陰兩虛證患者、非氣陰兩虛證患者以及健康人群的單核白細胞的轉錄組，運用ROC曲線判定方法篩選得到了QSOX1、FLJ20021、IFITM5、SP1、HRASLS2等9個差異表達基因，經過PCR組外驗證及分析后得到了兩個特別顯著基因SP1，EREG和三個一般顯著基因QSOX1，KPNA4，SLC7A11，并以SP1/KPNA4、SP1/QSOX1、SP1/SLC7A11、SP1/EREG的對數值作為自變量建立了邏輯斯蒂回歸模型，實現了客觀量化非小細胞肺癌氣陰兩虛證這一目標，并為臨床推廣提供了方法及檢驗核心參數，這一分子標記物組合的堿基序列及其在本領域中的合理變形，均屬于本發明技術方案要保護的內容。

這9個基因的具體的堿基序列為：

GTGATTCCATCATGTATCCCAGGAG?AGATGCACTGTCCATGCAAACAA

GGGCTTTGACAAACATTGCATC?CCCACACTGCTTGCTCACAGA