[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010889966.0
• 申請(qǐng)日: 2020-08-28
• 公開（公告）號(hào): CN114113588A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊祥良;楊海;張德軍;楊寶鳳;金偉;宋謙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué);武漢納達(dá)康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/533
• 代理公司: 華中科技大學(xué)專利中心 42201
• 代理人: 孫楊柳;李智

1.一種新型冠狀病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有以下試劑：酶標(biāo)二抗、磁標(biāo)異硫氰酸熒光素抗體、異硫氰酸熒光素修飾新型冠狀病毒抗原、定標(biāo)溶液、發(fā)光底物液、陽性對(duì)照品和陰性對(duì)照品；所述酶標(biāo)二抗為酶標(biāo)IgM二抗或酶標(biāo)IgG二抗；

所述異硫氰酸熒光素修飾新型冠狀病毒抗原上的新型冠狀病毒抗原能與新型冠狀病毒抗體特異性結(jié)合；

所述的磁標(biāo)異硫氰酸熒光素抗體能與所述異硫氰酸熒光素修飾新型冠狀病毒抗原上的異硫氰酸熒光素特異性結(jié)合；

所述酶標(biāo)二抗能與新冠病毒抗體特異性結(jié)合；

所述酶標(biāo)二抗上的酶能降解所述發(fā)光底物液中的發(fā)光底物，使所述發(fā)光底物發(fā)光。

2.如權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)二抗為酶標(biāo)羊抗人二抗、酶標(biāo)兔抗人二抗或酶標(biāo)鼠抗人二抗。

3.如權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)二抗為堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗，所述發(fā)光底物液中的發(fā)光底物為3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧環(huán)乙烷或3-氨基苯二甲酰肼。

4.如權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，所述發(fā)光底物液中的發(fā)光底物為3-氨基苯二甲酰肼。

5.如權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)二抗為用4-(N-馬來酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽活化的堿性磷酸酶與用2-亞氨基硫烷鹽酸鹽巰基化的二抗反應(yīng)得到。

6.如權(quán)利要求1-5任一所述的試劑盒應(yīng)用于檢測(cè)抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將定標(biāo)溶液、待測(cè)樣本、陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品分別與異硫氰酸熒光素修飾新型冠狀病毒抗原進(jìn)行混合，使所述定標(biāo)溶液、待測(cè)樣本、陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品中的新冠病毒抗體與所述異硫氰酸熒光素修飾新型冠狀病毒抗原上的新型冠狀病毒抗原特異性結(jié)合；

(2)向步驟(1)得到的產(chǎn)物中加入磁標(biāo)異硫氰酸熒光素抗體，使所述磁標(biāo)異硫氰酸熒光素抗體與所述異硫氰酸熒光素修飾新型冠狀病毒抗原上的異硫氰酸熒光素特異性結(jié)合，然后進(jìn)行磁分離，棄上清液后，清洗沉淀物；將酶標(biāo)二抗加入到上述清洗后的沉淀物中，使酶標(biāo)二抗上的抗體與所述定標(biāo)溶液、待測(cè)樣本、陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品的新冠病毒抗體特異性結(jié)合，然后進(jìn)行磁分離，棄上清液后，清洗沉淀物；

(3)向步驟(2)得到的產(chǎn)物中加入發(fā)光底物液，使所述發(fā)光底物液中的發(fā)光底物與特異性結(jié)合到所述定標(biāo)溶液、待測(cè)樣本、陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品的新冠病毒抗體結(jié)合的酶標(biāo)二抗中的酶反應(yīng)，檢測(cè)發(fā)光值；若待測(cè)樣本的發(fā)光值/定標(biāo)溶液的發(fā)光值≤1.0，則待測(cè)樣本中的新型冠狀病毒抗體為陰性；若待測(cè)樣本的發(fā)光值/定標(biāo)溶液的發(fā)光值＞1.0，待測(cè)樣本中的新型冠狀病毒抗體為陽性。

7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒應(yīng)用于檢測(cè)抗體的方法，其特征在于，步驟(1)所述將定標(biāo)溶液、待測(cè)樣本、陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品分別與異硫氰酸熒光素修飾新型冠狀病毒抗原進(jìn)行混合后，在20℃-37℃條件下反應(yīng)10min-15min。

8.如權(quán)利要求6所述的試劑盒應(yīng)用于檢測(cè)抗體的方法，其特征在于，步驟(2)中加入磁標(biāo)異硫氰酸熒光素抗體后，在20℃-37℃條件下反應(yīng)10min-15min；步驟(2)中加入酶標(biāo)二抗后，在20℃-37℃條件下反應(yīng)10min-15min。