[發明專利]一種清除干細胞分化體系中殘留的多能干細胞的方法

在審

• 申請號: 202010889268.0
• 申請日: 2020-08-28
• 公開（公告）號: CN111979175A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 熊志軍;劉文
• 申請（專利權）人: 安徽惠恩生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 王依

1.一種清除干細胞分化體系中殘留的多能干細胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、沖洗浸泡

優選干細胞分化產物，將其置于無菌托盤上，使用PBS反復緩慢沖洗，然后置于無菌生理鹽水中浸泡；

S2、水浴振蕩

將上述處理好的干細胞分化產物取出置于培養基中，培養基中加入CAS和EDTA，然后水浴振蕩；

S3、一次離心

待水浴振蕩后，將干細胞分化產物置于離心機內，進行離心分離；

S4、一次提取

待一次離心結束后，將上層清液提取出；

S5、抑制分裂

將一次提取后所剩的下層大顆粒物轉移至試管中，然后向試管中加入混合液，使用無菌玻璃棒緩慢攪拌，然后靜置；

S6、二次離心

將上述下層大顆粒物再次倒入離心機內，進行離心分離；

S7、二次提取

待二次離心后，將上層清液取出，然后將最下層大顆粒物收集；

S8、純度檢測

對一次提取中的上清液和二次提取中的大顆粒物進行純度檢測。

2.根據權利要求1所述的一種清除干細胞分化體系中殘留的多能干細胞的方法，其特征在于，所述S1中干細胞分化產物浸泡在無菌生理鹽水的時間為25—40min。

3.根據權利要求1所述的一種清除干細胞分化體系中殘留的多能干細胞的方法，其特征在于，所述S2中干細胞分化產物35—40℃在環境下水浴振蕩25—40min。

4.根據權利要求1所述的一種清除干細胞分化體系中殘留的多能干細胞的方法，其特征在于，所述S3中先控制離心機轉速變化為30—60rpm/s，使得轉速穩定在500—600rpm，保持轉速不變離心15—25min；然后再次控制轉速變化為30—50rpm/s，使得轉速為700—840rpm，保持轉速不變離心20—30min。

5.根據權利要求1所述的一種清除干細胞分化體系中殘留的多能干細胞的方法，其特征在于，所述S5中混合液為環磷酰胺、白消安、甲氨蝶呤和蝦青素中的至少一種。

6.根據權利要求1所述的一種清除干細胞分化體系中殘留的多能干細胞的方法，其特征在于，所述S6中先控制離心機轉速變化為30—50rpm/s，使得轉速穩定在300—450rpm，保持轉速不變離心10—15min；然后再次控制轉速變化為50—60rpm/s，使得轉速為600—800rpm，保持轉速不變離心20—30min。