[發明專利]利用CRISPR/Cas9和PiggyBac實現雙等位精確基因組編輯的系統

在審

• 申請號: 202010888329.1
• 申請日: 2020-08-28
• 公開（公告）號: CN111961686A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 張智英;李倩;徐坤;李欣憶;邢佳妮;李鵬程;麻麗霞;呂明
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/65
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：該編輯系統包括第一供體載體、第二供體載體以及用于打靶基因組的CRISPR/Cas9表達載體；所述第一供體載體和第二供體載體包括與所述基因組中由回文序列連接的上游片段和下游片段同源的序列以及連接在該上游片段和下游片段的同源序列之間的可通過同源重組修復替換所述回文序列的轉座子序列；第一供體載體和第二供體載體的轉座子序列包括用于對含有對應轉座子序列的基因組進行富集的篩選基因表達盒以及位于對應篩選基因表達盒兩端的可被轉座酶識別的反向末端重復序列，反向末端重復序列與位于對應端的所述上游片段或下游片段的同源序列相連。

2.根據權利要求1所述一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：所述CRISPR/Cas9表達載體包括目的基因靶位點sgRNA序列表達盒和Cas9核酸酶基因表達盒。

3.根據權利要求1所述一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：所述CRISPR/Cas9表達載體的打靶位點位于回文序列TTAA附近，打靶位點與回文序列TTAA的距離為≤50bp。

4.根據權利要求1所述一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：所述篩選基因表達盒包括正向藥物篩選基因序列；第一供體載體和第二供體載體的正向藥物篩選基因不同。

5.根據權利要求4所述一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：所述篩選基因表達盒還包括熒光蛋白基因序列；第一供體載體和第二供體載體的熒光蛋白基因不同。

6.根據權利要求4或5所述一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：所述篩選基因表達盒還包括負向藥物篩選基因序列。

7.根據權利要求6所述一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：所述篩選基因表達盒中，正向藥物篩選基因、熒光蛋白基因和負向藥物篩選基因為串聯表達。

8.根據權利要求1所述一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：所述反向末端重復序列采用PiggyBac轉座子系統中的特征序列5'ITR和3'ITR。

9.根據權利要求1所述一種雙等位基因組編輯系統，其特征在于：所述編輯系統還包括轉座酶表達載體。