[發明專利]一種快速高效的芝麻毛狀根遺傳轉化體系的建立方法有效
| 申請號： | 202010887616.0 | 申請日： | 2020-08-28 |
| 公開（公告）號： | CN112119912B | 公開（公告）日： | 2022-04-29 |
| 發明（設計）人： | 黎冬華;游均;魏夢園;劉愛麗;蘇如其;山姆;周瑢;張秀榮 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院油料作物研究所 |
| 主分類號： | C12N15/87 | 分類號： | C12N15/87;A01H4/00 |
| 代理公司： | 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102 | 代理人： | 喬宇 |
| 地址： | 430062 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 高效 芝麻 毛狀根 遺傳 轉化 體系 建立 方法 | ||
1.一種快速高效的芝麻毛狀根遺傳轉化體系的建立方法，其特征在于：包括以下步驟：
(1)培養得到芝麻無菌苗
(2)外植體轉化
在無菌芝麻苗離體子葉上產生傷口，得到外植體，然后利用發根農桿菌菌液侵染，置于共培養培養基上共培養，發根農桿菌菌液的濃度為：OD600為0.6-0.8；
(3)外植體抑菌及毛狀根誘導
將上述共培養的外植體用含有抑菌劑的清洗培養基清洗然后轉入誘導生根和繼代培養基上培養，誘導生根和繼代培養基中添加有抑菌劑；
(4)芝麻毛狀根繼代增殖培養
將上述獲得的誘導培養生長至12-14d的毛狀根從子葉上切下，接種到與前述相同的誘導生根和繼代培養基上繼續擴大培養；
步驟(2)中的共培養培養基為：NH4NO3 165mg/L+KNO3 190mg/L+CaCl2·2H2O 44mg/L+MgSO4·7H2O 37mg/L+KH2PO4 17mg/L+KI 0.83mg/L+H3BO3 6.2mg/L+MnSO4·4H2O 22.3mg/L+ZnSO4·7H2O 8.6mg/L+Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L+CuSO4·5H2O 0.025mg/L+CoCl2·6H2O0.025mg/L+Na2EDTA 37.25mg/L+FeSO4·7H2O 27.85mg/L+肌醇100mg/L+甘氨酸2mg/L+鹽酸硫胺素0.1mg/L+鹽酸吡哆醇0.5mg/L+煙酸0.5mg/L+蔗糖30g/L+嗎啉乙磺酸3.9g/L+瓊脂8g/L+二硫蘇糖醇150mg/L+AS(乙酰丁香酮)0.02g/L，pH5.4；
所述的清洗培養基為NH4NO3 1650mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 440mg/L+MgSO4·7H2O 370mg/L+KH2PO4 170mg/L+KI 0.83mg/L+H3BO3 6.2mg/L+MnSO4·4H2O 22.3mg/L+ZnSO4·7H2O 8.6mg/L+Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L+CuSO4·5H2O 0.025mg/L+CoCl2·6H2O0.025mg/L+Na2EDTA 37.25mg/L+FeSO4·7H2O 27.85mg/L+肌醇100mg/L+甘氨酸2mg/L+鹽酸硫胺素0.1mg/L+鹽酸吡哆醇0.5mg/L+煙酸0.5mg/L+蔗糖30g/L+噻孢霉素200-250mg/L+羧芐青霉素200-250mg/L，pH5.8；
誘導生根和繼代培養基為NH4NO3825mg/L+KNO3950mg/L+CaCl2·2H2O 220mg/L+MgSO4·7H2O 185mg/L+KH2PO485mg/L+KI 0.83mg/L+H3BO3 6.2mg/L+MnSO4·4H2O 22.3mg/L+ZnSO4·7H2O 8.6mg/L+Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L+CuSO4·5H2O 0.025mg/L+CoCl2·6H2O 0.025mg/L+Na2EDTA 37.25mg/L+FeSO4·7H2O 27.85mg/L+肌醇100mg/L+甘氨酸2mg/L+鹽酸硫胺素0.1mg/L+鹽酸吡哆醇0.5mg/L+煙酸0.5mg/L+蔗糖30g/L+MES 0.6g/L+瓊脂7g/L+特美汀200mg/L，pH5.8。
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