[發明專利]一種多功能干細胞培養方法及所用培養基

有效

• 申請號: 202010886963.1
• 申請日: 2020-08-28
• 公開（公告）號: CN111808799B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 李晗;王艷艷;吳雷振;張印
• 申請（專利權）人: 河南昆侖精準醫療科技有限公司;新鄉醫學院
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074
• 代理公司: 蕪湖宸澤知識產權代理事務所(普通合伙) 34208
• 代理人: 李俊建

1.一種多功能干細胞培養基，其特征在于，包括基礎培養基和添加劑，所述添加劑的成分以終濃度計，包括：轉鐵蛋白0.6μg/mL，干細胞生長因子7μg/mL，表皮細胞生長因子2μg/mL，L-谷胱甘肽25μg/mL，細胞保護劑0.3μg/mL，生長誘導劑0.6μg/mL，天冬氨酸6μg/mL，檸檬酸鐵34ng/mL，胰島素13μg/mL，泛酸0.9μg/mL；所述基礎培養基為DMEM培養基；所述細胞保護劑由D-海藻糖和羥乙基淀粉按質量比2:13組成；所述生長誘導劑由殼寡糖、膽酸鈉和丹皮酚按質量比10:5:1組成；所述殼寡糖的分子量為3000。

2.一種培養多功能干細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在培養瓶中加入權利要求1所述的多功能干細胞培養基，以一定的接種密度將多功能干細胞接種在上述培養瓶中，振蕩培養瓶使細胞均勻懸浮，振蕩速度為50-100r/min，于溫度為37℃、濕度為95％、相對體積分數為5％的CO₂培養箱中進行培養，每天換一次培養基；

(2)培養5-6天后，離心，離心速度為600-1000r/min，離心時間為4-8min，棄上清液，加入pH值為7.4的PBS緩沖液清洗細胞聚集體，離心，離心速度為600-1000r/min，離心時間為3-6min，棄上清液后加入胰蛋白酶，室溫消化5-8min，終止消化。

3.如權利要求2所述的培養多功能干細胞的方法，其特征在于，所述步驟(1)中以3×10⁵個/mL-1×10⁶個/mL的接種密度將多功能干細胞接種在上述培養瓶中。