[發(fā)明專利]一種用于冷凍電鏡成像用樣品臺(tái)

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010883086.2
• 申請(qǐng)日: 2020-08-28
• 公開（公告）號(hào): CN111999329A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫磊;張建國;張丹陽;季剛;孫飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院生物物理研究所
• 主分類號(hào): G01N23/2251
• 分類號(hào): G01N23/2251;G01N23/2204;G01N23/2202
• 代理公司: 北京中強(qiáng)智尚知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11448
• 代理人: 黃耀威

本發(fā)明公開了一種用于冷凍電鏡成像用樣品臺(tái)，包括底座和可拆卸的填充部件，所述底座為圓盤狀結(jié)構(gòu)，所述底座上設(shè)有凸沿，所述凸沿與底座圍成用于容置樣品的空腔，所述填充部件能夠在高壓冷凍時(shí)對(duì)所述凸沿的外側(cè)壁與底座形成的階梯結(jié)構(gòu)進(jìn)行填充，并在預(yù)減薄過程中取下。本發(fā)明可以容納加載高端冷凍透射電鏡上樣環(huán)，并可穩(wěn)定地被固定在上樣環(huán)和上樣底座之間，并可以被電鏡Autoloader中的機(jī)械手抓取，并放入鏡筒中進(jìn)行成像。因此，本發(fā)明提供的樣品臺(tái)可應(yīng)用于Autoloader的冷凍電鏡上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物樣品檢測領(lǐng)域，特別涉及一種用于冷凍電鏡成像用樣品臺(tái)。

背景技術(shù)

近年來，得益于冷凍電子斷層成像技術(shù)(cryo-electron tomography，cryo-ET)的發(fā)展，原位結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究發(fā)展迅速，其研究對(duì)象的狀態(tài)更接近生理?xiàng)l件，解析結(jié)構(gòu)的分辨率也在不斷提高。其最終目的是原位解析生物大分子及分子機(jī)器的結(jié)構(gòu)，從而在分子、細(xì)胞器、細(xì)胞等不同層次上闡述生命活動(dòng)的本質(zhì)。

冷凍電子斷層成像技術(shù)一般要求樣品厚度在500nm以下，否則成像時(shí)會(huì)產(chǎn)生過多的非彈性散射電子使得照片信噪比嚴(yán)重下降，后續(xù)圖像處理難以進(jìn)行。由于絕大部分細(xì)胞和組織樣品的厚度遠(yuǎn)超500nm，因此這類樣品采取的技術(shù)路線是冷凍固定——冷凍聚焦離子束(Cryo-FIB)減薄——冷凍電子斷層成像。通常，一些小細(xì)胞通過快速冷凍的方式，冷凍固定于電鏡專用的載網(wǎng)之上，然后通過冷凍聚焦離子束減薄后進(jìn)行冷凍電鏡成像。但是快速冷凍的冷凍深度最多在十幾個(gè)微米，對(duì)厚度動(dòng)輒在幾十到幾百微米的組織和一些大尺度細(xì)胞而言，單純的快速冷凍無法使樣品結(jié)構(gòu)得到良好的固定，因此必須通過高壓冷凍的技術(shù)。高壓冷凍后產(chǎn)生的樣品塊經(jīng)過冷凍切片機(jī)的修塊，再通過冷凍聚焦離子束減薄到幾百納米，最終送入冷凍電鏡進(jìn)行成像。

為了提高成像分辨率，人們使用帶有Autoloader的冷凍電鏡，如FEI Titan Kros進(jìn)行成像，這類電鏡分辨率高，可以得到更加真實(shí)清晰的原位結(jié)構(gòu)。然而，電鏡所用的樣品承載工具是載網(wǎng)，高壓冷凍所用的樣品承載工具是樣品臺(tái)，Autoloader無法裝載樣品臺(tái)，因此，現(xiàn)有的樣品臺(tái)無法應(yīng)用到Autoloader的冷凍電鏡上。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于冷凍電鏡成像用樣品臺(tái)，以解決現(xiàn)有的樣品臺(tái)無法應(yīng)用到Autoloader的冷凍電鏡上的問題。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，提供了一種用于冷凍電鏡成像用樣品臺(tái)，包括底座和可拆卸的填充部件，所述底座為圓盤狀結(jié)構(gòu)，所述底座上設(shè)有凸沿，所述凸沿與底座圍成用于容置樣品的空腔，所述填充部件能夠在高壓冷凍時(shí)對(duì)所述凸沿的外側(cè)壁與底座形成的階梯結(jié)構(gòu)進(jìn)行填充，并在預(yù)減薄過程中取下。

具體地，所述凸沿和填充部件均為環(huán)狀結(jié)構(gòu)，所述填充部件能夠套設(shè)在所述凸沿的外側(cè)壁上。

具體地，所述凸沿的中心與所述底座的中心相重合。

具體地，所述填充部件的高度與所述凸沿外側(cè)壁的高度相同。

具體地，所述底座和填充部件采用導(dǎo)熱的金屬材料制成。

本發(fā)明實(shí)施例提供了一種用于冷凍電鏡成像用樣品臺(tái)，可以容納加載高端冷凍透射電鏡上樣環(huán)，并可穩(wěn)定地被固定在上樣環(huán)和上樣底座之間，并可以被電鏡Autoloader中的機(jī)械手抓取，并放入鏡筒中進(jìn)行成像。因此，本發(fā)明提供的樣品臺(tái)可應(yīng)用于Autoloader的冷凍電鏡上。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的一種冷凍電鏡成像用樣品臺(tái)的結(jié)構(gòu)圖；

圖2為底座的結(jié)構(gòu)圖；