[發明專利]檢測非洲豬瘟病毒的鎖核酸修飾引物對、方法及試劑盒在審
| 申請號： | 202010882404.3 | 申請日： | 2020-08-28 |
| 公開（公告）號： | CN112063753A | 公開（公告）日： | 2020-12-11 |
| 發明（設計）人： | 李艷;李春玲;孫銘飛;張昆麗;勾紅潮;蔡汝健;楚品品;卞志標;宋帥;蔣智勇 | 申請（專利權）人： | 廣東省農業科學院動物衛生研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245 | 代理人： | 蘇運貞 |
| 地址： | 510640 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 檢測 非洲 豬瘟 病毒 核酸 修飾 引物 方法 試劑盒 | ||
1.一種檢測非洲豬瘟病毒的鎖核酸修飾引物對，其特征在于：其上游引物和下游引物的序列如Seq ID No.1和Seq ID No.2所示。
2.根據權利要求1所述的檢測非洲豬瘟病毒的鎖核酸修飾引物對，其特征在于：
所述的上游引物的序列中，第11位的堿基“T”、第15位的堿基“A”、第20位的堿基“T”均為鎖核酸；
所述的下游引物的序列中，第9位的堿基“A”、第12位的堿基“T”、第16位的堿基“A”均為鎖核酸。
3.權利要求1或2所述的檢測非洲豬瘟病毒的鎖核酸修飾引物對在制備非洲豬瘟病毒檢測試劑盒中的應用。
4.一種檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒，其特征在于：包含權利要求1或2所述的檢測非洲豬瘟病毒的鎖核酸修飾引物對。
5.根據權利要求4所述的檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒，其特征在于：
所述的檢測試劑盒還包含2×Tag Master Mix、陽性對照和陰性對照；
所述的陽性對照為包含所述的非洲豬瘟病毒的主要結構蛋白P72編碼基因B646L的重組質粒pUC57-ASFV-p72；
所述的基因B646L的核苷酸序列如Seq ID No.5所示；
所述的陰性對照為滅菌水。
6.權利要求4或5所述的檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒在鑒定和/或檢測非洲豬瘟病毒中的應用。
7.一種檢測非洲豬瘟病毒的PCR方法，其特征在于包括如下步驟：
(1)從樣品中提取病毒核酸；
(2)配制PCR反應體系；
(3)使用權利要求1或2所述的鎖核酸修飾引物對進行擴增反應。
8.根據權利要求7所述的檢測非洲豬瘟病毒的PCR方法，其特征在于：
步驟(2)中所述的PCR反應體系為：2×Tag Master Mix 10μL、體系中終濃度均為0.4μmol/L的上游引物和下游引物、模板DNA 1μL、ddH2O加至20μL。
9.根據權利要求7所述的檢測非洲豬瘟病毒的PCR方法，其特征在于：
步驟(3)中所述的擴增反應的反應條件為：預變性95℃、4min；94℃、30s，72.6℃、30s，72℃、40s，擴增35個循環；72℃、10min。
10.根據權利要求7-9任一項所述的檢測非洲豬瘟病毒的PCR方法，其特征在于：所述的PCR方法還包括瓊脂糖凝膠檢測步驟。
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