[發明專利]鴨丙型肝炎病毒和鴨新型微核糖核酸病毒雙重RT-PCR檢測引物

有效

• 申請號: 202010882032.4
• 申請日: 2020-08-28
• 公開（公告）號: CN111793723B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 陳翠騰;劉斌瓊;陳珍;朱春華;蔡國漳
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 福州創蔚來知識產權代理有限公司 35290
• 代理人: 鄭艷艷

本發明涉及一種鴨丙型肝炎病毒和鴨新型微核糖核酸病毒雙重RT?PCR檢測引物，所述引物如下：針對鴨丙型肝炎病毒的特異性引物序列如SEQ.ID.No.1、SEQ.ID.No.2所示，目的片段大小為502bp；針對鴨新型微核糖核酸病毒的特異性引物如SEQ.ID.No.3、SEQ.ID.No.4所示，目的片段大小為255bp。本發明利用所述引物能夠建立對DuHCV和DuMV進行鑒別診斷的雙重RT?PCR檢測方法，該方法能夠同時對鴨群中DuHCV和DuMV感染進行檢測，簡化操作程序，避免了常規PCR的重復檢測，具有低成本、高效率等優點。

技術領域

本發明屬于動物病毒學領域，具體涉及一種鴨丙型肝炎病毒和鴨新型微核糖核酸病毒雙重RT-PCR檢測引物。

背景技術

我國水禽養殖量居世界首位，是養禽業的重要組成部分，然而近年來在我國水禽當中陸續出現多種新發傳染病，并不斷流行，這些新發傳染病的發生已給我國水禽業造成了巨大的經濟損失，并已成為嚴重制約我國水禽產業健康穩定發展的關鍵因素。

根據國際病毒分類委員會(International Committee on Taxonomy ofViruses) 的最新分類，黃病毒科(Flaviviridae Family)下設4個病毒屬：黃病毒屬(Flavivirus)，有53個病毒種，有些是人畜共患病原體，如流行性乙型腦炎病毒、登革熱病毒；丙型肝病毒屬(hepacivirus)，有14個病毒種；Pegivirus病毒屬，有11個種；瘟病毒屬(Pestivirus)，有11個種，常見的如豬瘟病毒、牛病毒性腹瀉病毒。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是屬于黃病毒科、丙型肝炎病毒屬的單股正鏈RNA病毒，其病毒粒子呈球形，直徑約40-60nm，核衣殼呈二十四面體對稱，核衣殼外包繞含脂質的囊膜，囊膜上有刺突。鴨丙型肝炎病毒(duck hepacivirus，DuHCV)是從患有產蛋異常現象的鴨群中新發現的一種丙型肝炎病毒，其基因組具有一般丙型肝炎的特征，為單股正鏈RNA，基因組長為11422bp，編碼一個長度為10824bp的開放閱讀框(open reading frame， ORF)，編碼的多聚蛋白長為3607個氨基酸。

微核糖核酸科(Picornaviridae Family)病毒是重要的人畜共患病原體,它會導致人和動物出現亞臨床感染或從輕度發熱到心臟、肝臟和中樞神經系統的嚴重疾病。微核糖核酸科病毒是一類二十面體對稱、呈球形，直徑約20-30nm、無囊膜的單股正鏈RNA病毒。微核糖核酸科病毒包含63個病毒屬，常見的有口蹄疫病毒屬(Aphthovirus)、腸病毒屬(Enterovirus)、心病毒屬(Cardiovirus)、肝病毒屬(Hepatovirus)等。微核糖核酸科病毒基因長度一般為6.6kb-9.8kb，基因組一般僅含有一個大的開放閱讀框(open readingframe，ORF)，3’端為Poly A尾，5’端有VPg蛋白與之共價結合，基因組RNA有感染性。近年來，隨著病毒宏基因組學研究的不斷深入，歸屬于微核糖核酸科Megrivirus屬的病原先后從火雞、雞、鴿子和鴨中發現。基因組學分析發現，鴨新型微核糖核酸病毒(duck megrivirus,DuMV)的基因組結構特征和火雞源Megrivirus、雞源Megrivirus相似，且其聚蛋白含有典型微核糖核酸科病毒的特征性基序。遺傳進化分析表明，鴨新型微核糖核酸病毒(DuMV)與Megrivirus屬的火雞、雞、鴿子源新型微核糖核酸病毒處于同一遺傳進化分支。

但是，當前尚未見可同時對兩種新發鴨群病毒——鴨丙型肝炎病毒 (DuHCV)和鴨新型微核糖核酸病毒(DuMV)進行雙重RT-PCR檢測方法的引物的研究報道，本發明的建立可填補國內外相關領域空白。本發明建立的雙重RT-PCR檢測方法能夠對鴨群中流行的DuHCV和DuMV的進行鑒別診斷，為鴨群中開展新發DuHCV和DuMV流行病學調查及后續科學防控相關疾病奠定基礎，具有十分重要的研究意義。

發明內容