[發明專利]一種檢測粉紅副尼麗魚種群的引物組、試劑盒和方法

在審

• 申請號: 202010881844.7
• 申請日: 2020-08-28
• 公開（公告）號: CN111944910A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 陳治;童玉和;劉艷;萬武波
• 申請（專利權）人: 海南熱帶海洋學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一種檢測粉紅副尼麗魚(Paraneetroplus synspilus)種群的引物組，其特征在于，包括上游引物、下游引物和熒光探針；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.一種檢測粉紅副尼麗魚種群的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組、DNA提取試劑和qPCR擴增試劑。

3.一種檢測粉紅副尼麗魚種群的方法，包括以下步驟：

1)從待檢測環境中采集環境eDNA樣本，

2)提取所述環境eDNA樣本中的DNA獲得DNA樣本液；

3)以所述DNA樣本液為模板，用權利要求1所述的引物組進行qPCR擴增，并測定Ct值，當所述Ct值小于或等于35時判定結果為陽性，即待檢測環境中存在粉紅副尼麗魚種群，當Ct值大于35時判定結果為陰性，即環境中不存在粉紅副尼麗魚種群。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，環境eDNA樣本為水樣或底泥樣本。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，當所述環境eDNA樣本為水樣時，對水樣進行濾膜抽濾，將抽濾后的濾膜置于酒精中浸泡后，提取DNA。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，當所述環境eDNA樣本為底泥樣本時，將所述底泥樣本與液氮混合研磨后，提取DNA。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述qPCR擴增的體系以20μL計，包括以下組分：PremixExTaq 10μL、10μM的上游引物0.5μL、10μM的下游引物0.5μL、10μM的熒光探針0.5μL、100g/μL的DNA樣本液1μL和去離子水7.5μL。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述qPCR擴增的程序包括：95℃預變性10s；95℃變性10s，57℃退火10s，72℃延伸10s，共40個循環；72℃延伸3min，4℃保存。