[發明專利]博落回八氫番茄紅素脫氫酶基因的核苷酸序列及應用在審
| 申請號： | 202010876337.4 | 申請日： | 2020-08-27 |
| 公開（公告）號： | CN111961679A | 公開（公告）日： | 2020-11-20 |
| 發明（設計）人： | 曾建國;孫夢姍;黃鵬 | 申請（專利權）人： | 湖南美可達生物資源股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/53 | 分類號： | C12N15/53;C12N15/10;C12N9/02;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/64 |
| 代理公司： | 長沙楚為知識產權代理事務所(普通合伙) 43217 | 代理人： | 陶祥琲 |
| 地址： | 410300 湖南省長*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 博落回八氫 番茄 脫氫酶 基因 核苷酸 序列 應用 | ||
1.一種博落回八氫番茄紅素脫氫酶基因的核苷酸序列，其特征在于，所述博落回八氫番茄紅素脫氫酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的博落回八氫番茄紅素脫氫酶基因的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列利用如下所示的引物通過PCR擴增獲得，
上游引物McPDS-F：5'—ATGACTTTAACTGGTTCTGTT—3'
下游引物McPDS-R：5'—TTAAGCGATGCTTGCCTCTGT—3'。
3.根據權利要求3所述的博落回八氫番茄紅素脫氫酶基因的核苷酸序列，其特征在于，所述PCR擴增體系如下：
PCR程序如下：98℃預變性30s；98℃變性10s，58℃退火30s，72℃延伸2min，30個循環；72℃2min。
4.含有權利要求1所述的核苷酸序列的載體。
5.含有權利要求1所述的核苷酸序列的工程菌。
6.一種編碼博落回八氫番茄紅素脫氫酶蛋白的氨基酸序列，其特征在于，所述氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
7.一種如權利要求1所述的博落回八氫番茄紅素脫氫酶基因的核苷酸序列在CRISPR/Cas9體系構建中的應用。
8.根據權利要求7所述的博落回八氫番茄紅素脫氫酶基因的核苷酸序列在CRISPR/Cas9體系構建中的應用，其特征在于，包括如下步驟，
在博落回八氫番茄紅素脫氫酶的基因編碼區設計一條靶序列，退火磷酸化反應后，獲得靶序列雙鏈，將此靶序列雙鏈插入表達載體中，挑選陽性克隆的質粒進行測序，將測序正確的重組質粒轉化農桿菌，利用農桿菌介導侵染植物外植體后進行組織培養，獲得突變植株。
9.根據權利要求7所述的博落回八氫番茄紅素脫氫酶基因的核苷酸序列在CRISPR/Cas9體系構建中的應用，其特征在于，所述表達載體為pRGEB32。
10.根據權利要求7所述的博落回八氫番茄紅素脫氫酶基因的核苷酸序列在CRISPR/Cas9體系構建中的應用，其特征在于，所述農桿菌為根癌農桿菌GV3101。
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