[發明專利]一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液

在審

• 申請號: 202010873315.2
• 申請日: 2020-08-27
• 公開（公告）號: CN111944878A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 段志峰
• 申請（專利權）人: 廣州源古紀科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，所述保存液包括處理液Ⅰ和處理液Ⅱ，其中處理液Ⅰ包括鹽酸胍緩沖溶液、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑、堿金屬鹵化物、丙三醇，處理液Ⅱ包括堿金屬氫氧化物和表面活性劑。本發明使用分開保存的處理液Ⅰ和處理液Ⅱ作為肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，可以避免保存液產生沉淀，同時也能分別針對性處理不同的干擾雜質，能夠快速穩定肺泡罐洗液樣本，有效抑制核酸酶的活性，防止細胞裂解，同時可以很好的保護肺泡罐洗液中的游離核酸，保存時間久，提高核酸檢測準確性和便利性，在腫瘤性疾病、病毒等檢測及診斷中具有極大地應用價值。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，更具體地，涉及一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液。

背景技術

肺泡灌洗液是將纖維支氣管鏡直接插入氣道，到達炎癥或者病變部位，通過纖維支氣管鏡注入無菌生理鹽水，并反復抽吸，最終吸出的液體。肺泡灌洗液的成分包括細胞、肺表面活性物質、炎癥介質、生長因子、各種蛋質、酶類、脂類、核酸等。在臨床中，肺泡灌洗液主要用于病原微生物檢查，腫瘤性疾病檢測及診斷等。核酸是脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的總稱。隨著現代分子生物學的發展，證實了核酸(包括RNA和DNA)的存在為腫瘤、病毒的研究開辟了新的領域。肺癌是當今世界各國常見的惡性腫瘤，并已經成為絕大多數國家癌癥死亡的主要原因，被認為是目前對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤。游離RNA主要來源于腫瘤細胞，研究表明肺癌患者支氣管肺泡灌洗液游離RNA測定對肺癌的診斷具有很大的臨床意義，應用熒光定量PCR方法檢測支氣管肺泡灌洗液(BALF)中游離RNA診斷肺癌具有較高的特異性和敏感性。游離核酸具有取材廣泛方便，可擴增性、無創或微創的優點，在腫瘤的診斷、療效檢測、預后判斷等臨床應用方面均具有較好的應用前景。然而，在肺泡灌洗液樣本成分中存在一定的干擾因子，其會影響RNA測定的特異性和準確性，例如肺表面活性物質、炎癥介質、生長因子、真菌的細胞壁成分(1-3)-β-D葡聚糖等。此外，在室溫條件下取出肺泡灌洗液后，必需在4小時內送檢。如不能及時送檢，需放入4℃冰箱中保持，保存時間也僅約24h，這對肺泡灌洗液的送檢時間和保存條件要求也較為苛刻，給臨床檢測帶來了較高難度。

因此，需尋求一種提高肺泡灌洗液微生物核酸檢測準確性和便利性的保存液。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，所述保存液能夠維持肺泡罐洗液中各成分的穩定性，提高核酸測定的特異性和準確性，且儲存穩定性好。

一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，包括處理液Ⅰ和處理液Ⅱ，所述處理液Ⅰ包括鹽酸胍緩沖溶液、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑、堿金屬鹵化物、丙三醇，處理液Ⅱ包括堿金屬氫氧化物和表面活性劑。

本發明所述的肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液的處理液Ⅰ使用核酸酶抑制劑能夠抑制體系中的核酸酶活性，防止肺泡灌洗液樣本中的微生物核酸被降解，同時還可以維持各種細胞的穩定性，避免細胞裂解；鹽酸胍緩沖溶液能夠保持肺泡灌洗液樣本為堿性，為肺泡灌洗液樣本中的核酸提供相對穩定的pH值環境；代謝抑制劑能夠進一步抑制游離核酸的降解，穩定肺泡灌洗液中的游離核酸，堿金屬鹵化物能夠較好地維持細胞滲透壓，進一步避免細胞裂解。丙三醇可以使保存液更加穩定。處理液Ⅱ中的堿金屬氫氧化物能使反應干擾因子變性，強堿使蛋白質的氫鍵發生斷裂，同時也會與游離的氨基等形成鹽，避免肺泡罐洗液中蛋白質的干擾，同時也會與游離的氨基等形成鹽；表面活性劑能幫助分解蛋白酶，進一步降低肺泡灌洗液的干擾因子的影響。處理液Ⅰ和處理液Ⅱ分開保存，使用時再混合在一起，可以避免沉淀的產生，同時也能分別針對性處理不同的干擾雜質。本發明通過對上述各組分的合理使用，使得所制備的肺泡灌洗液中微生物核酸新型保存液能夠快速穩定肺泡罐洗液樣本，有效抑制核酸酶的活性，防止細胞裂解，同時可以很好的保護肺泡罐洗液中的游離核酸，保存時間久，能夠提高核酸檢測準確性和便利性，在腫瘤性疾病以及病毒等檢測及診斷中具有極大地應用價值。