[發(fā)明專(zhuān)利]一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010873315.2
• 申請(qǐng)日: 2020-08-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111944878A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 段志峰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州源古紀(jì)科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6806
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6806
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，所述保存液包括處理液Ⅰ和處理液Ⅱ，其中處理液Ⅰ包括鹽酸胍緩沖溶液、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑、堿金屬鹵化物、丙三醇，處理液Ⅱ包括堿金屬氫氧化物和表面活性劑。本發(fā)明使用分開(kāi)保存的處理液Ⅰ和處理液Ⅱ作為肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，可以避免保存液產(chǎn)生沉淀，同時(shí)也能分別針對(duì)性處理不同的干擾雜質(zhì)，能夠快速穩(wěn)定肺泡罐洗液樣本，有效抑制核酸酶的活性，防止細(xì)胞裂解，同時(shí)可以很好的保護(hù)肺泡罐洗液中的游離核酸，保存時(shí)間久，提高核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性和便利性，在腫瘤性疾病、病毒等檢測(cè)及診斷中具有極大地應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液。

背景技術(shù)

肺泡灌洗液是將纖維支氣管鏡直接插入氣道，到達(dá)炎癥或者病變部位，通過(guò)纖維支氣管鏡注入無(wú)菌生理鹽水，并反復(fù)抽吸，最終吸出的液體。肺泡灌洗液的成分包括細(xì)胞、肺表面活性物質(zhì)、炎癥介質(zhì)、生長(zhǎng)因子、各種蛋質(zhì)、酶類(lèi)、脂類(lèi)、核酸等。在臨床中，肺泡灌洗液主要用于病原微生物檢查，腫瘤性疾病檢測(cè)及診斷等。核酸是脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的總稱(chēng)。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展，證實(shí)了核酸(包括RNA和DNA)的存在為腫瘤、病毒的研究開(kāi)辟了新的領(lǐng)域。肺癌是當(dāng)今世界各國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤，并已經(jīng)成為絕大多數(shù)國(guó)家癌癥死亡的主要原因，被認(rèn)為是目前對(duì)人類(lèi)健康和生命威脅最大的惡性腫瘤。游離RNA主要來(lái)源于腫瘤細(xì)胞，研究表明肺癌患者支氣管肺泡灌洗液游離RNA測(cè)定對(duì)肺癌的診斷具有很大的臨床意義，應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中游離RNA診斷肺癌具有較高的特異性和敏感性。游離核酸具有取材廣泛方便，可擴(kuò)增性、無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)的優(yōu)點(diǎn)，在腫瘤的診斷、療效檢測(cè)、預(yù)后判斷等臨床應(yīng)用方面均具有較好的應(yīng)用前景。然而，在肺泡灌洗液樣本成分中存在一定的干擾因子，其會(huì)影響RNA測(cè)定的特異性和準(zhǔn)確性，例如肺表面活性物質(zhì)、炎癥介質(zhì)、生長(zhǎng)因子、真菌的細(xì)胞壁成分(1-3)-β-D葡聚糖等。此外，在室溫條件下取出肺泡灌洗液后，必需在4小時(shí)內(nèi)送檢。如不能及時(shí)送檢，需放入4℃冰箱中保持，保存時(shí)間也僅約24h，這對(duì)肺泡灌洗液的送檢時(shí)間和保存條件要求也較為苛刻，給臨床檢測(cè)帶來(lái)了較高難度。

因此，需尋求一種提高肺泡灌洗液微生物核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性和便利性的保存液。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，所述保存液能夠維持肺泡罐洗液中各成分的穩(wěn)定性，提高核酸測(cè)定的特異性和準(zhǔn)確性，且儲(chǔ)存穩(wěn)定性好。

一種肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，包括處理液Ⅰ和處理液Ⅱ，所述處理液Ⅰ包括鹽酸胍緩沖溶液、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑、堿金屬鹵化物、丙三醇，處理液Ⅱ包括堿金屬氫氧化物和表面活性劑。

本發(fā)明所述的肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液的處理液Ⅰ使用核酸酶抑制劑能夠抑制體系中的核酸酶活性，防止肺泡灌洗液樣本中的微生物核酸被降解，同時(shí)還可以維持各種細(xì)胞的穩(wěn)定性，避免細(xì)胞裂解；鹽酸胍緩沖溶液能夠保持肺泡灌洗液樣本為堿性，為肺泡灌洗液樣本中的核酸提供相對(duì)穩(wěn)定的pH值環(huán)境；代謝抑制劑能夠進(jìn)一步抑制游離核酸的降解，穩(wěn)定肺泡灌洗液中的游離核酸，堿金屬鹵化物能夠較好地維持細(xì)胞滲透壓，進(jìn)一步避免細(xì)胞裂解。丙三醇可以使保存液更加穩(wěn)定。處理液Ⅱ中的堿金屬氫氧化物能使反應(yīng)干擾因子變性，強(qiáng)堿使蛋白質(zhì)的氫鍵發(fā)生斷裂，同時(shí)也會(huì)與游離的氨基等形成鹽，避免肺泡罐洗液中蛋白質(zhì)的干擾，同時(shí)也會(huì)與游離的氨基等形成鹽；表面活性劑能幫助分解蛋白酶，進(jìn)一步降低肺泡灌洗液的干擾因子的影響。處理液Ⅰ和處理液Ⅱ分開(kāi)保存，使用時(shí)再混合在一起，可以避免沉淀的產(chǎn)生，同時(shí)也能分別針對(duì)性處理不同的干擾雜質(zhì)。本發(fā)明通過(guò)對(duì)上述各組分的合理使用，使得所制備的肺泡灌洗液中微生物核酸新型保存液能夠快速穩(wěn)定肺泡罐洗液樣本，有效抑制核酸酶的活性，防止細(xì)胞裂解，同時(shí)可以很好的保護(hù)肺泡罐洗液中的游離核酸，保存時(shí)間久，能夠提高核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性和便利性，在腫瘤性疾病以及病毒等檢測(cè)及診斷中具有極大地應(yīng)用價(jià)值。