[發明專利]用于小片段核酸純化篩選的方法

在審

• 申請號: 202010872689.2
• 申請日: 2020-08-26
• 公開（公告）號: CN111926060A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 李新;馬玉;信秀青;李瑞強;趙桂仿
• 申請（專利權）人: 天津諾禾致源生物信息科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 梁文惠

1.一種用于小片段核酸純化篩選的方法，其特征在于，包括以下步驟：利用核酸純化磁珠通過控制PEG8000和異丙醇百分比濃度配比進行第一輪純化，收取磁珠上清液回收N nt以下的核酸片段，其中，N100。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：利用核酸純化磁珠通過控制PEG8000和異丙醇百分比濃度配比對所述磁珠上清液進行第二輪純化，回收所述核酸純化磁珠上所吸附的核酸片段，所述核酸片段的長度大于M nt，NM。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，調整PEG8000百分比濃度在6％～7.5％之間，異丙醇百分比濃度在31％～35％之間，采用XP磁珠進行所述第一輪純化，吸附65nt及65nt以上的核酸片段，收取磁珠上清液回收65nt以下核酸片段。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，調整PEG8000百分比濃度在6％-8.5％之間，異丙醇濃度在38％～41％之間，采用XP磁珠進行第二輪純化，吸附45nt及45nt以上的核酸片段。

5.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，對獲取的核酸片段進行凝膠電泳驗證。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第一輪純化之前還包括：

核酸樣本起始量的確定：設計不同長度的單鏈DNA序列，制備25～95nt不同長度DNA的混合液，評估預定基礎磁珠體積、預定PEG8000和異丙醇的百分比濃度條件下核酸樣本最佳起始量。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在所述第一輪純化之前還包括：固定異丙醇百分比濃度，設置不同PEG8000百分比濃度，評估PEG8000對小片段核酸純化的效果，確定合適的核酸片段長度范圍。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，固定異丙醇百分比濃度為35％。

9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在所述第一輪純化之前還包括：評估適合小片段核酸純化的PEG8000和異丙醇百分比濃度配比。