[發(fā)明專利]一種甾體中間體的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010871528.1
• 申請日: 2020-08-26
• 公開（公告）號: CN112048535B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發(fā)明（設計）人: 杜艷;單東奇;白傲雪;楊旭濤
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇遠大仙樂藥業(yè)有限公司;浙江仙居仙樂藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12P33/10
• 分類號: C12P33/10;C12N1/14;C12R1/645;C12R1/845;C12R1/66
• 代理公司: 北京商專潤文專利代理事務所(普通合伙) 11317
• 代理人: 賈曉慶

本發(fā)明涉及一種甾體中間體的制備方法，屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明先制備中間體A的甾體混懸液，然后投入含有霉菌種子的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述中間體A在霉菌的作用下發(fā)生C₁₁位α羥化反應，在轉(zhuǎn)化階段對發(fā)酵液的pH值進行控制，并在發(fā)酵后期補加種子液，得到中間體C。本發(fā)明提供的技術(shù)方案，在轉(zhuǎn)化過程中，增加了控制pH值和后期補種兩個技術(shù)手段，使得底物中間體A基本消耗殆盡，轉(zhuǎn)化更為徹底，副產(chǎn)物占比可控制在0.7％以下，大幅提高反應效率，解決了甾體中間體轉(zhuǎn)化率低、副產(chǎn)物占比高的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種甾體中間體的制備方法。

背景技術(shù)

甾體激素類藥物是指分子結(jié)構(gòu)中具有甾體結(jié)構(gòu)的、在臨床上廣為應用的一類藥物，主要包括腎上腺皮質(zhì)激素和性激素兩大類，在化學藥物體系中占有重要的地位。近年來我國的甾體藥物行業(yè)發(fā)展加速，已成為醫(yī)藥工業(yè)體系的重要組成部分。與一般化學藥品生產(chǎn)相比，甾體藥物的生產(chǎn)技術(shù)同時涉及化學合成和生物發(fā)酵技術(shù)兩方面，因此具有工藝開發(fā)時間長、技術(shù)起點高的特點。作為甾體激素類藥物的代表，倍他米松以及地塞米松均屬于腎上腺皮質(zhì)激素，具有抗炎、抗感染、抗休克和抑制免疫等藥理作用。

在以皂素衍生物制備倍他米松和地塞米松的工藝過程當中，倍他米松/地塞米松羥化物(中間體C)是一個非常關(guān)鍵的中間體，由倍他米松/地塞米松脫溴物(中間體A)經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化制備而得，反應式如下圖所示:

C₁₁α羥化的生物轉(zhuǎn)化過程實際是分兩步完成的，首先是底物的C₂₁位的醋酸脂基團的水解，其次是水解后C₁₁位的羥化。底物倍他米松/地塞米松脫溴物(中間體A)在C₂₁位醋酸酯水解后得到中間產(chǎn)物倍他米松/地塞米松水解物(中間體B)，再完成C₁₁位α羥化得到終產(chǎn)物——倍他米松/地塞米松羥化物(中間體C)，其中倍他米松/地塞米松水解物(中間體B)為副產(chǎn)物。

相關(guān)中間體化學名對照表：

申請人于2019年提交了一份公開號為CN110747249A的發(fā)明專利，對上述生物轉(zhuǎn)化過程中的投料方式進行了改進，將底物中間體A的投料濃度提高到20g/L以上，產(chǎn)物中間體C的生物轉(zhuǎn)化率達到了90%左右，在發(fā)酵階段雜質(zhì)中間體B控制在1%~1.5%。

現(xiàn)有技術(shù)雖然提高了甾體C₁₁羥化的生物轉(zhuǎn)化率和底物投料濃度，但轉(zhuǎn)化后期仍有約6%~10%左右的底物不能徹底轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生的副產(chǎn)物含量較高。為了得到高純度的產(chǎn)物，后處理工藝包括了提取和精制兩個步驟，另外未轉(zhuǎn)化的原料也需要回收，增加了環(huán)保壓力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種甾體中間體的制備方法，能夠解決上述現(xiàn)有技術(shù)問題中的一種或多種。

發(fā)明人針對現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀，對轉(zhuǎn)化過程進行了深入細致的研究，研究過程中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有工藝在轉(zhuǎn)化過程中發(fā)酵液的pH呈持續(xù)上升現(xiàn)象。pH升高的主要原因是菌體自身代謝產(chǎn)物的積累所致，pH過高會抑制菌體生長并減少羥化酶的產(chǎn)生。另外發(fā)酵后期隨著轉(zhuǎn)化率的上升，產(chǎn)物濃度逐步增加，在一定程度上也會抑制羥化酶的活力，使轉(zhuǎn)化速度變緩甚至停滯。因此工藝改進主要圍繞提高發(fā)酵后期羥化酶的活力而開展，改進后中間體C的生物轉(zhuǎn)化率達到了98%以上，底物完全轉(zhuǎn)化，雜質(zhì)B也得到了較好的控制。

根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種甾體中間體的制備方法，先制備中間體A（倍他米松脫溴物或地塞米松脫溴物）的甾體混懸液，然后投入含有霉菌種子的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述中間體A在霉菌的作用下發(fā)生C₁₁位α羥化反應，在反應階段對發(fā)酵液的pH進行控制，并在發(fā)酵后期補加種子液，得到中間體C（倍他米松羥化物或地塞米松羥化物）。

生物發(fā)酵過程中使用的霉菌為金龜子綠僵菌、匍枝根霉、赭曲霉中的一種或多種。

具體步驟如下：