[發明專利]一種同時檢測尿液中BTEX代謝產物的方法

在審

• 申請號: 202010869627.6
• 申請日: 2020-08-26
• 公開（公告）號: CN111983090A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 劉彥君;楊惠媛;陸文靜;王前
• 申請（專利權）人: 中國礦業大學(北京)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

本發明提供了一種同時檢測尿液中BTEX代謝產物的方法，所述方法包括以下步驟：(a)樣品前處理：將尿液樣品酸化后過濾；(b)配制標準溶液；(c)高效液相色譜測定：色譜柱為C18色譜柱；流動相為甲醇和0.5％的(乙酸+磷酸)混合液，洗脫方式為梯度洗脫；(d)根據所述標準溶液經色譜系統獲得的標準曲線的線性回歸方程以及所述尿液樣品的峰面積，計算得出所述尿液樣品中各代謝產物的濃度。本發明建立的方法樣品前處理過程簡單，通過色譜柱和洗脫條件的選擇優化，能在30分鐘內完成一次檢測，并且能夠同時檢測分析多種BTEX代謝產物，操作簡單，分離效果好，具有良好的準確度和精密度和回收率。

技術領域

本發明涉及生物分析與檢測技術領域，尤其是涉及一種同時檢測尿液中BTEX代謝產物的方法。

背景技術

BTEX一般指苯系物，是苯的衍生物的總稱，主要包括苯、甲苯、乙苯、二甲苯、苯乙烯等，廣泛存在于石油、加油站、塑料制品以及工業副產物中。BTEX具有高致癌風險且對生物體具有毒性，被國際癌癥組織(International Agency for Research on Cancer，IARC)列為重點關注物質。BTEX的人體暴露途徑通常有三種：呼吸、攝入和皮膚接觸，其中呼吸暴露是最主要的暴露途徑。

生活環境中接觸BTEX的主要來源包括汽車尾氣、汽油揮發以及有機物燃燒等，職業環境中BTEX接觸主要為油漆工、鞋廠以及石化工人等。BTEX的健康風險包括短期大劑量接觸引起的中樞神經系統麻醉和長期接觸引起的造血系統毒性和癌癥。歐美國家推薦1ppm作為BTEX的8h職業接觸限值，我國也于2002年將BTEX的時間加權平均容許濃度修訂為6mg/m³。目前部分職業人群接觸BTEX的接觸水平以ppb級為主，而普通人群日常也存在1-20ppb的BTEX接觸。

低劑量的BTEX的接觸現狀使得在使用傳統的外暴露量進行風險評估結果可靠性較差。生物檢測可反映人體暴露的真實風險，通過對生物樣本(如血液、尿液、肺泡等)中的生物標志物檢測，能有效的反映個體樣本中污染物的負荷程度。尿液在采集過程中具有對受試者無傷害、易獲取等特點，是生物檢測的主要手段。生物標志物是判斷職業暴露水平的生化指標，可用于評價外源化學物的接觸水平及其引起的有害生物效應。已有針對人體生物標志物進行的研究表明，反,反式黏康酸(t,t-MA)可作為苯接觸的生物標志物；馬尿酸可作為甲苯的生物標志物；苯乙醇酸和苯乙醛酸可作為乙苯和苯乙烯的接觸生物標志物；甲基馬尿酸可作為二甲苯的接觸生物標志物。

BTEX尿液生物標志物常用檢測方法包括分光光度法、氣相色譜法以及高效液相色譜法(HPLC)。分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度進行定性和定量分析的方法。汪家興(1990)采用分光光度法測定尿樣中馬尿酸濃度，該法最低檢測濃度為6mg/L；但在實驗過程中由于日光對馬尿酸反應產物有破壞作用，操作不當會影響顯色效果，重復性較低。氣相色譜法是以氣體為流動相，根據物質在流動相和固定相中的分配系數差異對樣品物質進行分離，該法檢測精度較高但樣品前處理操作繁瑣，普及性差。高效液相色譜法不受樣品揮發度和熱穩定性的限值，具有高效、方便等優點是目前實驗室采用的主要檢測手段。對于尿液中BTEX代謝產物的檢測，目前HPLC可實現的多為某種代謝產物的單獨測定，而在實際環境中BTEX往往同時存在，如何同步測定尿中BTEX的代謝產物，構建快速高效的檢測方法是亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種同時檢測尿液中BTEX代謝產物的方法，所述方法能夠同時且快速檢測分析多種BTEX代謝產物，操作簡單、成本低廉、分離效果好。

為實現上述目的，本發明提供了一種同時檢測尿液中BTEX代謝產物的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)樣品前處理：將尿液樣品酸化后過濾；

(b)配制反,反式黏康酸、馬尿酸、苯乙醇酸、苯乙醛酸以及甲基馬尿酸的標準溶液；